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农杆菌介导BADH基因转化马铃薯的耐盐研究

作　者: 张正国
导　师: 卢翠华
学　校: 东北农业大学
专　业: 作物遗传育种
关键词: 马铃薯遗传转化 BADH基因耐盐性
分类号: S532
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 46次
引　用: 2次
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内容摘要

本研究以马铃薯品种费乌瑞它的脱毒微型薯为外植体,利用农杆菌介导法将BADH耐盐相关基因导入马铃薯,经PCR和Southern检测,证明BADH基因己转入马铃薯基因组中。同时对遗传转化的影响因素激素种类与浓度、脱菌抗生素种类与浓度、共培养时间、筛选方式等进行了优化。试验对转BADH基因费乌瑞它进行耐盐性鉴定,结果4个转基因株系与对照相比叶片相对含水量、丙二醛含量、超氧化物歧化酶活性三个指标差异显著。主要研究结果如下:1薯块再生培养基确定为MS+1mg/L IAA+2mg/L ZT。2农杆菌菌液浓度为OD₆₀₀=0.7,侵染时间为5min时,转化效果最佳,费乌瑞它薯块出芽率分别为90.00%,污染率12.50%。3共培养时间对愈伤组织诱导率影响很大,薯块最佳共培养时间为2d。4对脱菌抗生素的浓度进行了比较试验,进口头孢噻肟钠对农杆菌LBA4404菌株有效抑制浓度为200 mg/L,且在有效抑制浓度下对外植体无不良影响,并且可以有效抑制农杆菌的滋生。5试验采用延迟一周的筛选方式,抗性选择剂为草丁磷（PPT）,结果表明薯块芽诱导阶段PPT浓度为5mg/L,生根阶段的PPT浓度为4mg/L。6试验获得抗性植株30株,经PCR检测有10株呈阳性,进一步的Southem杂交出现4株阳性信号,说明基因已经整合到马铃薯基因组中。转BADH基因费乌瑞它后代的生物学鉴定对Southern杂交呈阳性的植株进行抗盐性试验,植株生长期间分别用Nacl浓度为0.3%、0.5%、0.7%、0.9%的盐水浇灌进行比较试验,植株在Nacl浓度为0.7%时生长正常。生理检测结果表明,转基因株系平均叶片相对含水量比对照高出非转基因植株10.43%,SOD活性比对照高出1.32倍,对照植株MDA含量则高于转基因株系8.87%。综合以上结果,说明BADH基因在4个转基因株系均已表达,提高了马铃薯转基因株系的耐盐性。

农杆菌介导BADH基因转化马铃薯的耐盐研究

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