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北五味子乙素提取纯化及生物活性研究

作　者: 商红军
导　师: 孟宪军
学　校: 沈阳农业大学
专　业: 食品科学
关键词: 五味子乙素提取分离纯化阿霉素脂质体抗肿瘤作用
分类号: R285
类　型: 博士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

五味子含有多种营养成分,是一种具有很大开发前景的药食兼用植物。五味子中的主要活性物质是木脂素,而五味子乙素在五味子木脂素中含量较高,是主要的功能成分。目前研究发现,五味子乙素具有很强的抗氧化性和清除自由基作用,能够预防阿霉素引起的心脏毒性,其脂质体作为药物新型剂,能够提高药物的靶向性,降低药物毒性。本文以辽宁产北五味子为原料,通过正交实验研究了五味子中功能性成分五味子乙素的提取方法,采用大孔树脂法进行纯化,并在此基础上对五味子乙素提取液的清除自由基、抑菌作用进行初步研究；研究了五味子乙素脂质体和五味子乙素—阿霉素脂质体的制备工艺；对制备的五味子乙素脂质体进行了理化性质研究；对五味子乙素—阿霉素脂质体进行了理化性质、药动力学特性进行了研究；对五味子乙素的抗肿瘤作用进行了初步研究。主要研究结果如下：1.溶剂法提取五味子乙素条件为：溶剂浓度90%,液料比7：1,处理时间2.5h,次数3次：超临界CO2提取五味子乙素条件为：压力30 Mpa,温度40℃,粒度40目,时间2.0h；微波辅助提取五味子乙素条件为：微波功率为500 w,液料比为10：1,处理时间为8 min；超声波提取五味子乙素条件为：超声波功率180W,液料比为10：1,处理时间为40min。2.实验中所用的树脂中,AB-8树脂的吸附和解吸能力都最强,适宜于五味子乙素的分离纯化。用AB-8树脂分离纯化五味子提取物时,其工艺参数为：上样浓度0.09mgmL-上样流速为1.0 mL.min-1,静态吸附时间为150mmin,解吸流速为0.5 mL.min-1。3.采用旋转蒸发薄膜法制备五味子乙素脂质体。通过单因素及正交试验,确定最佳制备工艺为：大豆磷脂与胆固醇质量比为1：0.1,五味子乙素载量1%,旋转蒸发温度为65℃,pH值为6.9。在此条件下,五味子乙素脂质体的粒度分布为70～200 nm,平均粒径值为(132.5士19.6)nm(n=3),Zeta电位为(-37.3±2.5)mV,包封率为92.4%。4.采用旋转蒸发薄膜法制备五味子乙素—阿霉素脂质体。取五味子乙素为0.2g时,通过单因素及其正交试验确定最佳制备工艺为：大豆磷脂与胆固醇的比为1：0.05,大豆磷脂与阿霉素的比为2：0.01,旋转蒸发温度为60℃,pH值为7.4。在此条件下制备的五味子乙素-阿霉素脂质体粒度小,包封率高。粒度分布为50～200 nm,平均粒径值为(135.2±19.6)nm(n=3),Zeta电位为(-38.6±2.5)mV,包封率为96.45%。五味子乙素-阿霉素脂质体的药动力学试验结果表明,五味子乙素-阿霉素脂质体能够提高阿霉素的血浆药物浓度,延长药物在血液的停留时间,以获得更充足的时间到达靶向部位,提高治疗效果。5.急性毒性试验结果：五味子乙素-阿霉素脂质体LD50=52.8mg/kg,阿霉素脂质体LD50=41.5mg/kg,阿霉素LD50=18.2mg/kg。由此可初步得知,五味子乙素—阿霉素脂质体能够降低阿霉素的毒性。采用动物S-180实体肿瘤模型,采用尾静脉注射给药法,对五味子乙素的抗肿瘤作用进行了初步研究。结果表明,本试验制备的五味子乙素脂质体抗肿瘤作用并不显著,制备的五味子乙素—阿霉素脂质体的抗肿瘤效果比较显著。6.五味子乙素提取液对自由基的清除效果明显,其中对.OH清除作用大于相同浓度的Vc,其半数清除浓度为0.2 mg.mL-1；对O2·-清除作用小于Vc,其半数清除浓度为0.24 mg.mL-1。五味子乙素提取液对金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、沙门氏菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌均有一定的抑制作用,其中对白色念珠菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用最强,最低抑菌浓度为0.25 mg.mL-1,对根霉、黑曲霉、南阳酵母无明显抑菌活性。

全文目录

摘要  14-16
ABSTRACT  16-18
第一章前言  18-41
  1.1 五味子概述  18-21
    1.1.1 五味子的种类  18-19
    1.1.2. 五味子化学成分  19-21
  1.2 五味子木脂素成分的提取  21-25
    1.2.1 木脂素的动态变化  21-23
    1.2.2 溶剂提取法  23
    1.2.3 超临界CO_2提取  23-24
    1.2.4 微波辅助萃取  24
    1.2.5 超声波辅助提取  24-25
  1.3 五味子木脂素分离纯化的研究进展  25-27
    1.3.1 柱层析分离  25
    1.3.2 大孔树脂吸附分离  25-26
    1.3.3 色谱技术分离  26-27
  1.4 五味子木脂素分析检测方法的研究进展  27-29
    1.4.1 紫外分光光度法  27
    1.4.2 薄层色谱法  27-28
    1.4.3 高效液相色谱法(HPLC)  28
    1.4.4 GC-MS法  28-29
    1.4.5 红外光谱检测  29
  1.5 五味子乙素生物活性研究进展  29-31
    1.5.1 对肝脏的影响  29-30
    1.5.2 抗癌治疗中的作用  30
    1.5.3 抗病毒作用  30
    1.5.4 抗溃疡作用  30-31
    1.5.5 防护晶状体氧化损伤  31
    1.5.6 抗氧化作用  31
  1.6 中药清除自由基的研究概况  31-35
    1.6.1 具有抗氧化功能的中草药  32
    1.6.2 中草药抗氧化作用机理  32
    1.6.3 中药抗氧化活性的评价方法  32-35
  1.7 中药抑菌研究概况  35-36
  1.8 脂质体技术  36-39
    1.8.1 脂质体  36-37
    1.8.2 脂质体的制备  37-38
    1.8.3 脂质体的主要特点  38-39
  1.9 立题依据与研究内容  39-41
    1.9.1 本课题的立题依据  39-40
    1.9.2 课题研究内容  40-41
第二章提取五味子乙素方法的研究  41-74
  2.1 实验仪器与材料  41-42
    2.1.1 实验仪器  41-42
    2.1.2 实验材料  42
  2.2 实验方法  42-48
    2.2.1 五味子乙素测定方法的确定  42
    2.2.2 溶剂回流提取五味子乙素  42-43
    2.2.3 超临界流体萃取五味子乙素  43-45
    2.2.4 微波辅助萃取技术提取五味子乙素  45-47
    2.2.5 超声波提取五味子乙素  47-48
  2.3 结果与分析  48-67
    2.3.1 五味子乙素测定方法的确定  48-51
    2.3.2 溶剂提取的正交实验  51-53
    2.3.3 超临界CO_2萃取五味子乙素的单因素实验结果  53-60
    2.3.4 微波辅助萃取五味子乙素结果  60-65
    2.3.5 超声波提取五味子乙素结果  65-67
  2.4 结论  67-69
    2.4.1 溶剂回流提取五味子乙素结论  67-68
    2.4.2 超临界CO_2流体萃取五味子乙素结论  68-69
    2.4.3 微波辅助萃取五味子乙素结论  69
    2.4.4 超声波提取五味子乙素结论  69
  2.5 讨论  69-74
    2.5.1 超临界CO_2流体萃取五味子乙素  69-71
    2.5.2 微波萃取五味子乙素  71-73
    2.5.3 超声波萃取五味子乙素  73-74
第三章大孔树脂纯化五味子乙素  74-84
  3.1 实验仪器与材料  74
    3.1.1 实验仪器  74
    3.1.2 实验材料  74
  3.2 五味子乙素的大孔树脂纯化  74-79
    3.2.1 五味子乙素样品的制备  74-75
    3.2.2 大孔树脂的预处理  75-76
    3.2.3 大孔树脂对五味子乙素的静态实验  76-78
    3.2.4 大孔树脂对五味子乙素的静态吸附动力学实验  78-79
    3.2.5 大孔树脂对五味子乙素的动态吸附试验  79
  3.3 结果与分析  79-82
    3.3.1 大孔树脂对五味子乙素的静态吸附动力学实验  79-80
    3.3.2 最大上样量的确定  80
    3.3.3 蒸馏水洗脱体积的确定  80
    3.3.4 洗脱流速的影响  80-81
    3.3.5 洗脱溶剂用量的确定  81-82
  3.4 结论  82
  3.5 讨论  82-84
第四章五味子乙素脂质体的制备  84-95
  4.1 材料与仪器  84-85
    4.1.1 材料与试剂  84
    4.1.2 主要仪器与设备  84-85
  4.2 试验方法  85-88
    4.2.1 五味子乙素脂质体的制备配方  85
    4.2.2 五味子乙素脂质体包封率的测定  85
    4.2.3 五味子乙素脂质体制备工艺参数的选择  85-87
    4.2.4 五味子乙素脂质体制备正交试验  87
    4.2.5 五味子乙素脂质体的理化性质  87-88
  4.3 结果与分析  88-93
    4.3.1 五味子乙素的标准曲线  88
    4.3.2 五味子乙素脂质体的工艺参数  88-92
    4.3.3 五味子乙素脂质体的理化性质  92-93
  4.4 结论  93
  4.5 讨论  93-95
第五章五味子乙素-阿霉素脂质体的制备  95-108
  5.1 材料与仪器  95-96
    5.1.1 材料与试剂  95
    5.1.2 主要仪器与设备  95-96
  5.2 试验方法  96-100
    5.2.1 五味子乙素-阿霉素脂质体的制备  96-97
    5.2.2 五味子乙素-阿霉素脂质体包封率的测定  97-98
    5.2.3 五味子乙素-阿霉素脂质体的理化性质  98-99
    5.2.4 五味子乙素-阿霉素脂质体的药动力学  99-100
  5.3 结果与分析  100-106
    5.3.1 阿霉素的标准曲线  100
    5.3.2 单因素实验结果  100-103
    5.3.3 正交试验结果与分析  103-104
    5.3.4 五味子乙素-阿霉素脂质体的理化性质  104-105
    5.3.5 五味子乙素—阿霉素脂质体的药动力学  105-106
  5.4 结论  106
  5.5 讨论  106-108
第六章五味子乙素的抗肿瘤作用  108-112
  6.1 材料与试剂  108
  6.2 试验方法  108-109
    6.2.1 五味子乙素对阿霉素的降毒作用  108-109
    6.2.2 五味子乙素的抗肿瘤作用  109
  6.3 结果与分析  109-110
    6.3.1 五味子乙素对阿霉素的降毒作用  109
    6.3.2 五味子乙素的抗肿瘤作用  109-110
  6.4 结论  110
  6.5 讨论  110-112
第七章五味子乙素提取液清除自由基、体外抑菌试验  112-121
  7.1 材料与仪器  112-113
    7.1.1 材料与试剂  112-113
    7.1.2 主要仪器与设备  113
  7.2 试验方法  113-115
    7.2.1 五味子乙素提取液清除自由基研究  113-114
    7.2.2 五味子乙素提取液抑菌研究  114-115
  7.3 结果与分析  115-118
    7.3.1 五味子乙素提取液清除自由基研究  115-116
    7.3.2 五味子乙素提取液抑菌研究  116-118
  7.4 结论  118
  7.5 讨论  118-121
    7.5.1 五味了乙素提取液对自由基的清除作用  118-119
    7.5.2 五味子乙素提取液的抑菌作用  119-121
参考文献  121-131
致谢  131-132
攻读学位论文期间发表文章  132

北五味子乙素提取纯化及生物活性研究

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