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河南周边省份马铁菊头蝠的种下分类研究

作　者: 何新焕
导　师: 牛红星
学　校: 河南师范大学
专　业: 动物学
关键词: 马铁菊头蝠聚类分析细胞色素b 系统发育 RFLP
分类号: Q959
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

为了弄清河南周边省份马铁菊头蝠的种下分类以及遗传多样性水平,本研究以河南周边四个省份11个地区的马铁菊头蝠为研究对象,根据形态学特征结合分子生物学方法对马铁菊头蝠的不同地理种群进行分析研究。首先对马铁菊头蝠进行形态测量,运用SPSS统计分析软件进行分析,初步验证不同地理种群之间在表型特征上的差异性,确定其种下分类地位;其次通过对其线粒体Cytb基因进行PCR扩增、限制性酶切,利用分子生物学软件进行线粒体Cytb基因序列分析以及酶切分析,探讨马铁菊头蝠种下分类地位,揭示各地区马铁菊头蝠之间的系统发育关系和遗传多样性水平。主要研究结果如下:1.运用形态学方法,研究四个省份11个地区的87只马铁菊头蝠的形态差异,利用形态学数据进行聚类分析、主成分分析、判别分析以及单因素方差分析,结果表明11个地理种群在形态上已经有了一定程度的分化,但分化并不大,差异并不明显。2.采用分子生物学方法对十一个地区的马铁菊头蝠进行系统发育学研究,对其线粒体Cytb基因进行扩增,构建系统进化树,系统树结果表明:马铁菊头蝠11个地理种群与日本样本先聚在一支,而云南亚种聚为另一支;河北、山西、安徽与湖北红安之间的遗传距离范围只有0%到0.8%,但与湖北麻城之间的遗传距离差异相对较大为1.8%到2.0%。认为研究区域马铁菊头蝠为日本亚种,且不同地理种群已出现遗传变异。3.基于RFLP分子标记技术对各地理种群进行遗传多样性分析。利用五种限制性内切酶对马铁菊头蝠线粒体Cytb进行酶切分析,酶切结果显示,HaeⅢ、HinfⅠ和BamHⅠ对PCR产物进行酶切,酶切条带没有产生多态性,说明这三种酶对马铁菊头蝠Cytb基因没有产生酶切位点的变异。用TaqI进行酶切只有湖北麻城的马铁菊头蝠产生了与其他地区不同的条带,这进一步反映了湖北麻城马铁菊头蝠相对于其他地区已经产生了较大的遗传变异。AfaⅠ酶切结果显示这种酶都在湖北麻城、河北邢台以及临城的部分地理种群产生酶切片断的多态性,说明这些地区的部分地理种群可能已经出现分化。4.形态数据与分子生物学分析表明:河南周边四省的马铁菊头蝠应与日本种群同属于日本亚种。

全文目录

摘要  4-6
ABSTRACT  6-11
1 引言  11-27
  1.1 翼手目综述  11-13
  1.2 翼手目的起源  13
  1.3 生态学  13-15
    1.3.1 栖息环境  13-14
    1.3.2 食性  14
    1.3.3 繁殖与育幼  14-15
    1.3.4 冬眠  15
    1.3.5 蝙蝠在生态系统中的作用  15
  1.4 蝙蝠对人类的作用  15-16
  1.5 蝙蝠的回声定位  16-17
  1.6 马铁菊头蝠概述  17-19
    1.6.1 马铁菊头蝠的形态学特征  17
    1.6.2 冬眠与栖息环境  17-18
    1.6.3 马铁菊头蝠的分类与分布  18
    1.6.4 马铁菊头蝠的研究现状  18-19
  1.7 分子系统学  19-21
    1.7.1 分子系统学的相关概念及形成  19-20
    1.7.2 分子系统学的发展及研究方法  20-21
  1.8 分子生物学研究  21-25
    1.8.1 分子水平的进化  21-22
    1.8.2 线粒体DNA  22-23
    1.8.3 线粒体Cytb 基因的特点及其研究  23-24
    1.8.4 系统进化树的构建方法  24
    1.8.5 几种建树方法的比较  24-25
  1.9 研究的目的与意义  25-27
2 材料和方法  27-39
  2.1 形态学分析  27-30
    2.1.1 标本采集  27-28
    2.1.2 形态数据测量与分析方法  28-30
  2.2 分子学分析方法  30-39
    2.2.1 样本采集  30
    2.2.2 实验药品及仪器  30-32
    2.2.3 基因组DNA 的提取  32-33
    2.2.4 基因组DNA 的检测  33
    2.2.5 PCR 扩增  33-35
    2.2.6 目的DNA 片断测序  35
    2.2.7 限制性酶切  35-36
    2.2.8 序列分析与系统树的构建  36-39
3 结果分析  39-63
  3.1 形态数据结果分析  39-46
    3.1.1 数据测量结果  39-41
    3.1.2 主成分分析结果  41-43
    3.1.3 聚类分析结果  43-44
    3.1.4 判别分析结果  44-45
    3.1.5 单因素方差分析结果  45-46
  3.2 分子生物学分析结果  46-49
    3.2.1 基因组DNA 提取结果  46-48
    3.2.2 Cytb 基因的PCR 结果  48-49
    3.2.3 PCR 扩增产物的纯化回收  49
  3.3 马铁菊头蝠线粒体Cytb 基因测序结果及分析  49-63
    3.3.1 测序结果  49-55
    3.3.2 马铁菊头蝠线粒体Cytb 基因碱基序列变异分析  55-56
    3.3.3 四省份不同地区马铁菊头蝠系统发育分析  56-59
    3.3.4 马铁菊头蝠RFLP 分析结果  59-63
4 讨论  63-67
  4.1 形态学研究  63-64
  4.2 马铁菊头蝠地理种群之间的遗传变异与种下分类研究  64
  4.3 限制性酶切分析研究  64-67
参考文献  67-77
致谢  77-79
攻读学位期间发表的学术论文目录  79-80

河南周边省份马铁菊头蝠的种下分类研究

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