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模式生物果蝇抗肿瘤药物筛选模型的建立

作　者: 王帅
导　师: 尹俊；方唯硕
学　校: 内蒙古农业大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 黑腹果蝇模式生物肿瘤药物筛选模型
分类号: R965.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
下　载: 215次
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内容摘要

本研究以黑腹果蝇作为模式生物,拟通过杂交和同源重组等遗传学方法,建立基于细胞凋亡作用的抗肿瘤药物筛选模型。实验中采用已有的绿色荧光蛋白(GFP)标记的FLP/FRT重组体系(T1)和scrib/TM6B平衡株系(T2)进行杂交,获得眼部器官芽表型带有GFP-scrib-/-的嵌合体肿瘤发生模型,表现为成虫个体眼部组织异常增生,荧光显微观察(激发光波长450-490 nm)、电泳结果和western blot的结果表明有GFP的表达,说明得到的个体眼部细胞GFP的表达和眼部组织异常增生表型连锁,此外探讨了用荧光酶标仪建立这种联系的方法的可行性。此外,采用土豆加药培养基,制成了便于观察和进行药物定量的加药培养基。采用其他合成的药物和有激活JNK途径的化合物山梨醇制成加药培养基对果蝇进行初步的培养,未发现这些药物在果蝇的生长发育和肿瘤发生方面有所影响。

全文目录

摘要  3-4
Abstract  4-8
1 引言  8-16
  1.1 果蝇作为模式生物的优势  8-9
  1.2 模式生物模型与传统药物筛选  9-10
  1.3 Scrib 与肿瘤的关系  10-12
    1.3.1 1Scrib 蛋白  10-11
    1.3.2 Scrib 是肿瘤抑制因子  11-12
      1.3.2.1 在果蝇中scribble 基因的研究  11
      1.3.2.2 hScrib 是上皮组织中的抑癌基因产物  11-12
  1.4 肿瘤与细胞凋亡  12
  1.5 JNK途径与scrib肿瘤模型的关系  12-14
  1.6 果蝇药物筛选模型的建立  14-15
  1.7 研究内容  15
  1.8 本实验的意义  15-16
2 材料与方法  16-25
  2.1 实验动物  16
  2.2 试剂与仪器  16
  2.3 试验方法  16-25
    2.3.1 培养基制备  16-21
      2.3.1.1 普通培养基制备  16
      2.3.1.2 土豆加药培养基的制备  16-17
      2.3.1.3 DMSO 空白对照培养基的制备  17
      2.3.1.4 备选阳性药物的加药培养基的制备  17-18
      2.3.1.5 初筛药物培养基的制备  18-21
        2.3.1.5.1 编号为B3，B4，C3 合成药物培养基的制备  18
        2.3.1.5.2 编号IMM-NK-001--IMM-NK-009 合成药物培养基的制备  18-21
    2.3.2 实验方法  21
      2.3.2.1 处女蝇的挑选  21
      2.3.2.2 杂交试验  21
      2.3.2.3 药物作用实验  21
    2.3.3 检测方法  21-25
      2.3.3.1 普通显微镜观察  21
      2.3.3.2 荧光显微镜观察  21
      2.3.3.3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)  21-22
      2.3.3.4 荧光酶标仪检测  22
      2.3.3.5 Western Blot 检测结果  22-25
3 结果与分析  25-51
  3.1 土豆培养基与普通玉米培养基的对照  25-26
  3.2 杂交实验结果  26-46
    3.2.1 各种系表型特征及特性  26-28
    3.2.2 杂交结果  28
    3.2.3 荧光显微镜观察结果  28-29
    3.2.4 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果  29-30
    3.2.5 Western blot 实验结果  30-31
    3.2.6 荧光酶标仪检测结果  31-46
      3.2.6.1 5min 内与时间相关的图谱  31-33
      3.2.6.2 480 激发光，51011m 做发射光光谱  33-34
      3.2.6.3 绿色荧光蛋白荧光370－490 激发光光谱，发射光为510 nm 的实验..  34-41
        3.2.6.3.1 采用基本的破碎体系  34-36
        3.2.6.3.2 筛选均有绿色荧光蛋白表达的100 只最为浓度的最大阈值，对破碎体系做激发光光谱  36-39
        3.2.6.3.3 读孔板中100μL、200μL 浓度梯度做激发光光谱试验  39-41
      3.2.6.4 480 nm 激发，510 nm 发射的荧光强度数值  41-44
        3.2.6.4.1 基本的破碎体系，480 nm 激发，510 nm 发射  41-42
        3.2.6.4.2 筛选100 只绿色荧光蛋白表达的蛹为最大的浓度阈值  42-43
        3.2.6.4.3 蛹经过筛选都有绿色荧光蛋白表达，取样量的梯度实验  43-44
      3.2.6.5 395 nm 激发，510 nm 发射的荧光强度值  44-46
        3.2.6.5.1 蛹的个数对读孔板中绿色荧光蛋白的浓度的影响  44-45
        3.2.6.5.2 395nm 定点激发，510nm 发射光荧光强度  45-46
  3.3 药物培养结果  46-51
    3.3.1 初筛药物作用的统计结果  47
    3.3.2 IMM-NK-001 到IMM-NK-009 样品筛选结果  47-50
    3.3.3 Sorbitol 药物筛选结果  50-51
4 讨论  51-53
  4.1 关于给药方法  51
  4.2 关于果蝇药物筛选模型  51-53
5 结论  53-54
致谢  54-55
参考文献  55-59
作者简历  59

模式生物果蝇抗肿瘤药物筛选模型的建立

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