学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

用链霉素抗性筛选技术拓展放线菌药用菌株资源的研究

作　者: 韩晓
导　师: 崔承彬
学　校: 中国人民解放军军事医学科学院
专　业: 药物化学
关键词: 链霉素素抗性放线菌抗肿瘤筛选
分类号: R91
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
下　载: 238次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

在微生物活性菌株筛选过程中,分离得到的绝大部分菌株往往因在所采用的活性指标下不显示任何生物活性而被闲置或销毁,造成前期投入的极大浪费和资源开发利用效率严重低下。如何二次开发这些菌株资源是具有实际意义的重要研究课题。微生物对抗生素的抗性突变不仅诱导了核糖体结构的改变,使突变株获得了对某些抗生素的抗性,同时,也改变或激活了其次级代谢产物的某些生物合成调控系统,使突变株生产某些代谢产物的能力大幅度提高或者使突变株代谢生产母株原不生产的代谢产物。鉴于此,本研究基于这些发现利用抗生素抗性筛选技术,开展了二次开发无活性放线菌菌株的相关方法学探索研究。首先本文从渤海湾的海洋样品中分离得到127株海洋微生物,其中真菌80株,放线菌47株,并以人白血病K562细胞为受试细胞,采用MTT法结合显微镜下细胞形态学检测的方法,筛选了这些菌株发酵样品的抗肿瘤活性,经初筛和复筛,得到100μg/mL浓度下对K562细胞的抑制率大于40%的活性菌株8株(占菌株总数的6.3% ,其中放线菌4株,占放线菌数的8.5%,真菌4株,占真菌数的5.0%)。抑制率在20%~40%的放线菌6株(占放线菌数的12.7%)和大量无活性菌株,这些活性菌株为寻找抗肿瘤活性先导化合物的研究提供了活性菌株资源,同时得到的无活性菌株为核糖体工程拓展微生物药源菌株资源的研究提供了菌株来源。继而,以2株无活性菌株HLF-39和HLF-43为出发菌,在分别测定链霉素MIC的基础上。利用在会大于MIC的不同浓度链霉素的固体平板培养基,进行了抗性筛选,结果得到了232株对不同浓度链霉素产生抗性的突变株。突变株的菌落形态、孢子颜色以及代谢产物与母体菌株有显著的差异。利用上述相同抗肿瘤活性模型对突变株进行了抗肿瘤活性筛选,获得100μg/mL样品浓度下对K562细胞的抑制率大于40%的活性突变株4株。对其中一株具有显著抗肿瘤活性的突变株CHS-21101采用活性追踪的方法对其发酵产物的活性成分进行了初步分离,得到2个单体化合物。利用波谱学方法阐明了2个化合物的结构为环(4-羟基-脯氨酸-亮氨酸)和Phencomycin,其中化合物1在100μg/mL对K562细胞有明显的增殖抑制作用。综上,本论文利用链霉素抗性筛选技术对2株没有抗肿瘤活性的海洋放线菌进行了抗性筛选,得到突变株232株,经对所得突变株发酵产物的活性筛选,得到具有显著抗肿瘤活性的突变株4株。并经对其中一株活性突变株的代谢产物进行初步研究,得到了2个单体化合物,分别鉴定为环(4-羟基-脯氨酸-亮氨酸)和Phencomycin。这些研究结果表明链霉素抗性筛选技术用于开拓药源微生物活性菌株资源是基本可行的。该方法简单易行,利用该方法对无活性放线菌菌株进行二次开发,将会有效拓展药源微生物菌株来源。

全文目录

摘要  6-8
Abstract  8-11
第一章前言  11-18
  第一节抗生素作用机理—核糖体工程  11-13
  第二节目前研究现状  13-16
  第三节立题依据  16-18
第二章微生物菌株分离纯化及抗肿瘤活性筛选  18-42
  第一节菌株的分离纯化  18-20
  第二节活性筛选  20-38
  第三节小结与讨论  38-40
  第四节实验部分  40-42
第三章无活性菌株的链霉素抗性筛选与活性筛选  42-61
  第一节无活性菌株的链霉素抗性筛选  42-46
  第二节突变株抗肿瘤活性筛选  46-59
  第三节小结与讨论  59-61
第四章活性突变株 C H S - 2 11 0 1 的初步研究  61-68
  第一节突变株与原始菌株的差异  61-63
  第二节活性突变株 CHS-21101 的发酵  63-65
  第三节 CHS-21101 代谢产物的初步研究  65-67
  第四节小结与讨论  67-68
结语  68-70
参考文献  70-74
综述  74-80
个人简历  80-81
致谢  81-82
缩略词表  82-83
附图  83-84

用链霉素抗性筛选技术拓展放线菌药用菌株资源的研究

内容摘要

全文目录

相似论文