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党参水溶性多糖的提取工艺研究

作　者: 李瑞燕
导　师: 高建平
学　校: 山西医科大学
专　业: 药物化学
关键词: 党参多糖 提取 工艺 药理活性 分离纯化
分类号: TQ461
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要


党参（Radix Codonopsis）为桔梗科党参属植物,干燥根入药,可补中益气,健脾益肺。用于脾肺虚弱,气短心悸,食少便溏,虚喘咳嗽,内热消咳。现代药理学研究证实党参具有抗肿瘤、增强免疫功能及抗氧化等多种生物学活性,其主要活性成分为党参多糖。本课题对潞党参多糖进行了提取工艺研究;对党参多糖的药理活性进行了初步研究;在此基础上,对党参多糖进一步分离纯化,得到了三个多糖亚级分。论文主要内容如下:1、党参多糖提取工艺研究。根据单糖易溶于水和乙醇,而多糖易溶于水,不溶于一定浓度的乙醇的特点,本课题首先用乙醇除去单糖、寡糖等小分子物质,然后采用水提醇沉的方法,用正交实验进行主次因素分析,以党参多糖提取率为检测指标对长治产潞党参中多糖进行提取工艺参数的考察,筛选出了党参多糖最佳提取工艺。综合考虑提取效率、节约成本等因素进一步对工艺进行优化,最终确定党参饮片料液比为1∶10,提取1.0小时,提取3次,提取液浓缩至1g/ml,加入乙醇至醇沉浓度为80%,党参多糖提取率为26.45%。经过3次平行实验验证,结果表明:该工艺简便、稳定、准确,可用于党参多糖的提取。2、党参多糖体内抗肿瘤活性实验的初步研究。对腹腔荷S180腹水瘤细胞小鼠灌胃党参多糖1 g/kg·d,连续7天后记录小鼠的生存天数。与对照组相比,荷S180腹水瘤细胞小鼠的生命延长率为34.29%。结果表明,党参多糖可以延长腹腔荷S180腹水瘤细胞小鼠的存活时间。3、党参多糖的分离纯化。党参多糖经DEAE-纤维素柱层析分离纯化,以水和不同浓度的氯化钠溶液梯度洗脱,采用苯酚-硫酸法跟踪检测,收集各组分,真空干燥,最后得到五个党参多糖亚级分CPS-1、CPS-2（量少,未做进一步研究）、CPS-3、CPS-4、CPS-5。4、党参多糖亚级分的初步结构分析。采用紫外光谱扫描和高效凝胶渗透色谱法对党参多糖亚级分CPS-1、CPS-3、CPS-4、CPS-5进行纯度检查。经紫外光谱全波长扫描,CPS-1、CPS-3、CPS-4、CPS-5在260 nm和280 nm处无核酸及蛋白吸收峰,表明其中不含蛋白质和核酸;经高效凝胶渗透色谱检测CPS-1、CPS-3、CPS-4均为均一组分,其分子量分别为2500 Dal、1.15×105 Dal、大于200万Dal。采用苯酚-硫酸法和硫酸-咔唑法分别测定了四个多糖亚级分的含量。结果表明,CPS-1为中性多糖,多糖含量以葡萄糖计为76.87%;CPS-3为酸性多糖,中性糖含量以葡萄糖计为28.51%,糖醛酸含量以半乳糖醛酸计为59.63%;CPS-4为酸性多糖,中性糖含量以葡萄糖计为25.02%,糖醛酸含量以半乳糖醛酸计为50.68%。采用纸层析初步分析党参多糖亚级分CPS-1、CPS-3、CPS-4的单糖组成。实验结果表明:CPS-1中含有D-葡萄糖和L-鼠李糖;CPS-3中含有D-半乳糖、D-阿拉伯糖、葡萄糖醛酸,可能含有D-木糖;CPS-4中含有D-半乳糖、D-阿拉伯糖、半乳糖醛酸,可能还有D-木糖、葡萄糖醛酸。

全文目录


中文摘要  9-11
英文摘要  11-13
前言  13-14
第一章 党参总糖和单糖含测方法的建立  14-20
  1 仪器与试剂  14
  2 党参总糖的含量测定  14-17
    2.1 测定原理  14
    2.2 实验方法与结果  14-17
  3 单糖的含量测定—3,5-二硝基水杨酸标准曲线的制备  17-18
    3.1 原理  17
    3.2 3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂的制备  17
    3.3 3,5-二硝基水杨酸(DNS)标准曲线的制备  17-18
  4 结果与讨论  18-20
第二章 党参多糖的提取工艺研究  20-26
  1 仪器与试剂  20
  2 提取工艺的研究  20-22
    2.1 多糖提取原理  20-21
    2.2 考察石油醚脱脂对多糖性状的影响  21
    2.3 考察乙醇回流脱色除杂的必要性  21
    2.4 党参多糖水提部分正交设计  21
    2.5 党参多糖醇沉部分正交设计  21-22
  3 实验结果与分析  22-25
    3.1 石油醚脱脂对多糖性状的影响  22
    3.2 考察乙醇回流脱色除杂的必要性  22
    3.3 水提部分正交实验结果  22-23
    3.4 醇沉部分正交实验结果  23-24
    3.5 党参多糖提取工艺的验证  24-25
  4 结论与讨论  25-26
第三章 党参多糖药理活性研究  26-30
  1 引言  26
  2 实验材料  26
    2.1 动物  26
    2.2 细胞株  26
    2.3 试剂  26
    2.4 器材  26
  3 实验方法和结果  26-29
    3.1 急性毒性实验  26-28
    3.2 体内抗肿瘤实验  28-29
  4 结论与讨论  29-30
第四章 党参多糖的分离纯化  30-38
  1 仪器与试剂  30
  2 纯化  30-33
    2.1 脱蛋白原理  30
    2.2 考马斯亮蓝法标准曲线的制备  30-32
    2.3 脱蛋白方法的考察  32-33
  3 党参多糖的分离—DEAE-纤维素柱层析  33-37
    3.1 原理  33
    3.2 DEAE-纤维素柱的预处理  33
    3.3 装柱  33-34
    3.4 洗脱  34
    3.5 透析  34
    3.6 结果与分析  34-37
  4 结论与讨论  37-38
第五章 党参多糖的初步结构分析  38-49
  1 仪器与试剂  38
  2 党参多糖亚级分的理化性质  38
  3 党参多糖亚级分的纯度检查  38-44
    3.1 紫外可见光谱扫描  38-40
    3.2 高效凝胶渗透色谱法检测党参多糖亚级分纯度及分子量的测定  40-44
  4 糖含量测定  44-46
    4.1 糖醛酸标准曲线的制备—硫酸-咔唑法  44-45
    4.2 糖含量的测定  45-46
  5 党参多糖亚级分的单糖组成分析  46
    5.1 党参多糖亚级分的完全酸水解  46
    5.2 纸层析  46
  6 结论与讨论  46-49
第六章 结论与展望  49-51
  1 结论  49-50
  2 展望  50-51
综述  51-57
参考文献  57-60
个人简介  60-61
致谢  61

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中图分类: > 工业技术 > 化学工业 > 制药化学工业 > 中草药制剂的生产
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