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杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因在骨髓衰竭性疾病及造血干细胞移植中的实验研究

作　者: 王韵
导　师: 曹祥山
学　校: 苏州大学
专　业: 内科学
关键词: 杀伤细胞免疫球蛋白样受体骨髓衰竭性疾病相关供者造血干细胞移植术移植物抗宿主病自然杀伤细胞树突状细胞 CD158
分类号: R551.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:研究杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer cell immunoglobin-like receptor,KIR)基因多态性与骨髓衰竭性疾病(bone marrow failure syndromes,BMFS)的相关性,以及相关供者造血干细胞移植中供受者的KIR受配体模式对造血干细胞移植(hemotopoietic stem cell transplantation, HSCT)预后的影响,最后,在体外实验中进一步研究应用单克隆抗体CD158a和CD158b封闭供者KIR的抑制性受体KIR2DL1及KIR2DL3后,对供者来源NK细胞的功能影响,探索KIR功能修饰后供者NK细胞降低受者移植物抗宿主病(graft versus host disease, GVHD)的分子机制。方法:采用序列特异性引物聚合酶链式反应(sequence specific primer-polymerase chain reaction, SSP-PCR)的方法,对40例骨髓增生异常综合症(myelodysplatic syndrome, MDS)、20例再生障碍性贫血(aplastic anemia, AA)患者以及60例健康对照者的杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)基因进行检测,分析KIR基因与这些疾病发生的遗传学相关性,同时对15对2008年1月至2010年6月间在我院行全相合相关供者的造血干细胞移植的供受者进行HLA(histocompatibility leukocyte antigen)及KIR高分辨基因分析,收集15对供受者的外周血中的单核细胞,供者单核细胞经Dnyal磁珠负选高纯度NK细胞,受者树突状细胞(dendric cell, DC)作为靶细胞,抗CD158a和CD158b单克隆抗体封闭供者KIR的抑制性受体,并采用噻唑蓝(Methyl thiazolyl tetrazolium, MTT)比色法分别检测抑制性KIR封闭前后对靶细胞的杀伤作用。结果:(1)检出目前已知的全部16个KIR基因。(2)MDS和AA患者组较健康对照组有多种激活性KIR基因(2DS1、2DS2、2DS3、2DS5及3DS1)频率增加。2DS5的基因频率在AA患者组较MDS组明显减少。(3)15对供受者中8例供者KIR2DL2/L3有相应的受者配体HLA-C1;3例供者KIR2DL1有相应的受者配体HLA-C2;9例供者KIR3DL1有相应的受者配体HLA-Bw4;6例供者KIR3DL2有相应的受者配体HLA-A3、A11。KIR受配体模式为宿主抗移植物(Host versus graft, HVG)方向的移植患者Ⅲ-Ⅳ级急性GVHD发生率较KIR全相合的患者明显降低(0 vs 35.7%, P=0.01),宿主抗移植物(HVG)方向的移植患者较移植物抗宿主(graft versus host, GVH)方向Ⅲ-Ⅳ级急性GVHD发生率也有降低(0 vs 7.1%),但总的急、慢性GVHD发生率,HVG较GVH及KIR全相合患者无明显差异。2例供者的激活性KIR(KIR2DS1、KIR2DS2)有相应受者HLA配体的病例,均发生了较严重的急性GVHD。在全相合相关供者造血干细胞移植中,kir不相合患者较kir全相合患者拥有更好的总体生存率(OS, overall survival)及更低的移植相关死亡率(TRM, transplant related mortality)(P<0.05)。(4)在效靶比为10:1的情况下,供者来源的NK细胞经抗体封闭后,对受者DC的杀伤活性明显提高,随着封闭抗体浓度的增加而增高,各组间比较均具有显著性差异(P<0.05)。结论:KIR的遗传背景与骨髓衰竭性疾病的发生有一定相关性,在相关供者造血干细胞移植中供受者的KIR遗传背景可以预示HSCT的aGVHD发生率、OS率和TRM发生率,体外实验证明利用特定抗体封闭相应KIR可以提高供者来源NK细胞的杀伤活性,使得异源反应性NK细胞输注,作为一种新的免疫治疗的方法成为可能。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-9
引言  9-15
  参考文献  13-15
第一章杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因在常州地区汉族人群分布情况及其与骨髓衰竭性疾病的相关性研究  15-23
  1.1 材料和方法  15-16
  1.2 结果  16-20
  1.3 讨论  20-23
第二章杀伤细胞免疫球蛋白受体在HLA 全相合相关供者造血干细胞移植中的实验研究  23-33
  2.1 材料和方法  23-24
  2.2 结果  24-30
  2.3 讨论  30-33
第三章供者NK 细胞经CD158 抗体修饰对受者树突状细胞杀伤作用的实验研究  33-42
  3.1 材料  33-34
  3.2 研究方法  34-36
  3.3 结果  36-39
  3.4 讨论  39-42
结论  42-43
参考文献  43-47
综述  47-56
  参考文献  53-56
中英文缩略词表  56-59
攻读学位期间公开发表的论文  59-60
致谢  60-61

杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因在骨髓衰竭性疾病及造血干细胞移植中的实验研究

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