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桑叶中脱氧野尻霉素和白藜芦醇的提取及纯化工艺研究

作　者: 吴旭
导　师: 饶力群
学　校: 湖南农业大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 桑叶 白藜芦醇 脱氧野尻霉素 HPLC HPLC-ELSD 提取 纯化
分类号: Q946
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


桑叶中含有的DNJ(1-脱氧野尻霉素,1-deoxynojirimycin)有很高的药用价值,据研究表明DNJ是一种很好的降血糖物质。然而目前有关桑叶中DNJ的分离、纯化及药理研究不多。白藜芦醇因其具有丰富的生物活性,已保健品、化妆品领域有了很多产品,不过对桑叶中的白藜芦醇研究还稀有报道。本论文以桑叶为研究材料,在建立HPLC定量分析DNJ和白藜芦醇的基础上,重点开展桑叶中白藜芦醇的提取、DNJ的提取及纯化工艺研究,为桑叶功能成分综合开发利用,特别是为降血糖药品和保健品的研制奠定基础。主要研究结果如下：1、采用高效液相色谱对桑叶中的白藜芦醇的含量进行测定,确定了最佳分析条件：色谱柱Hypersil ODS C18 (150 mm×4.6 mm,5μm),温度30°C，流速1mL/min,检测波长为298nm,流动相为甲醇：水,采用梯度洗脱：0-2.5-6.8-10min=3：7-6.4：3.6-3：7。根据回流提取法中对不同溶剂,乙醇浓度、料液比、提取时间及温度的单因素实验结果进行正交试验,确定桑叶白藜芦醇最佳提取条件为：提取溶剂为乙醇,回流时间为105 min,乙醇浓度为80%,料液比为1：13,回流温度为60℃。2、采用高效液相色谱仪对桑叶中DNJ的含量进行测定,确定了最佳分析条件：色谱柱Hypersil ODS (150 mm×4.6 mm,5μm),30°C,流速0.8mL/min,检测波长为265nm,流动相为甲醇：0.1%醋酸=55：45(v/v)。同时对HPLC-DAD检测法与ELSD检测法进行了比较。结果表明两种方法之间没有显著性差异。本文使用的是HPLC检测法,并优化了HPLC柱前衍生法测定DNJ。3、根据回流提取法中的提取溶剂,乙醇浓度、料液比、提取时间、提取温度及pH值的单因素实验,进行正交试验,确定桑叶中DNJ最佳提取条件为：在70°C下,料液比为1：40,pH=6,乙醇浓度为80%,提取时间为2 h。4、通过静态吸附-解吸实验,对不同型号大孔树脂和聚酰胺纯化DNJ进行了比较,确定选择LSI-4大孔树脂,确定最佳纯化DNJ的工艺条件：上样浓度为0.48mg/mL,上样流速为2BV/h,洗脱液为60%乙醇,洗脱流速为2.5BV/h。该条件下,DNJ得到初步的纯化,经检测纯度可达到35.6%,得率为65%。5、选用D370阳离子树脂进一步纯化DNJ,确定最佳纯化条件为：上样流速为2BV/h,先用2BV蒸馏水洗涤后,用0.5moL/L氨水以2BV/h的流速进行洗脱。收集峰比较集中的洗脱液,得到纯化后DNJ纯度可达到80%,得率为61.3%。

全文目录


摘要  4-6
Abstract  6-13
第一章 文献综述  13-20
  1 桑叶的功能性成分  13-15
    1.1 维生素  13
    1.2 食物纤维  13
    1.3 矿物质  13-14
    1.4 黄酮类化合物  14
    1.5 氨基酸  14
    1.6 植物甾醇  14
    1.7 生物碱  14-15
  2 桑叶的药理作用  15-17
    2.1 降血糖作用  15
    2.2 降血脂作用  15
    2.3 降血压作用  15-16
    2.4 对消化系统的作用  16
    2.5 抗衰老作用  16
    2.6 抗病毒作用  16
    2.7 对葡萄糖淀粉酶的抑制作用  16-17
    2.8 防癌作用  17
  3 桑叶中的DNJ  17-19
    3.1 DNJ的结构  17
    3.2 桑叶中DNJ的研究现状  17-19
  4 桑叶中的白藜芦醇  19
  5 立题依据和意义  19-20
第二章 桑叶中白藜芦醇提取工艺的研究  20-31
  1 前言  20
  2 材料与方法  20-23
    2.1 试验材料  20
    2.2 试验仪器、药品  20-21
    2.3 试验方法  21-23
      2.3.1 HPLC法测定白藜芦醇的含量  21
      2.3.2 精密度试验  21
      2.3.3 稳定性试验  21
      2.3.4 重复性试验  21-22
      2.3.5 加样回收实验  22
      2.3.6 不同提取条件提取白藜芦醇试验  22-23
  3 结果与分析  23-29
    3.1 白藜芦醇的HPLC标准曲线  23-24
    3.2 精密度试验结果  24-25
    3.3 稳定性试验结果  25
    3.4 重复性试验结果  25
    3.5 加样回收实验结果  25-26
    3.6 溶剂对提取白藜芦醇的影响  26
    3.7 不同浓度对提取白藜芦醇的影响  26-27
    3.8 料液比对提取白藜芦醇的影响  27
    3.9 提取温度对提取白藜芦醇的影响  27
    3.10 提取时间对提取白藜芦醇的影响  27-28
    3.11 正交试验结果  28-29
  4 讨论  29-31
第三章 桑叶中脱氧野尻霉素含量的测定  31-39
  1 前言  31
  2 材料与方法  31-33
    2.1 试验材料  31
    2.2 试验试剂  31
    2.3 试验仪器  31-32
    2.4 试验方法  32-33
      2.4.1 溶液的制备  32
      2.4.2 DNJ的衍生化方法  32
      2.4.3 测定方法  32
      2.4.4 线形关系的考察  32-33
      2.4.5 精密度试验  33
      2.4.6 稳定性试验  33
      2.4.7 重现性试验  33
      2.4.8 加样回收试验  33
  3 结果与分析  33-38
    3.1 线性关系  33-35
    3.2 精密度试验结果  35-36
    3.3 稳定性试验结果  36-37
    3.4 重现性试验结果  37
    3.5 加样回收试验结果  37-38
  4 讨论  38-39
第四章 脱氧野尻霉素的提取工艺研究  39-48
  1 前言  39
  2 材料与方法  39-41
    2.1 试验材料  39
    2.2 试验试剂  39-40
    2.3 试验仪器  40
    2.4 试验方法  40-41
      2.4.1 不同溶剂提取脱氧野尻霉素试验  40
      2.4.2 不同浓度乙醇提取脱氧野尻霉素试验  40
      2.4.3 不同温度提取脱氧野尻霉素试验  40-41
      2.4.4 不同时间提取脱氧野尻霉素试验  41
      2.4.5 不同pH提取脱氧野尻霉素试验  41
      2.4.6 不同料液比提取脱氧野尻霉素试验  41
    2.5 正交试验  41
  3 结果与分析  41-47
    3.1 溶剂对脱氧野尻霉素提取的影响  41-42
    3.2 乙醇浓度对提取脱氧野尻霉素的影响  42
    3.3 提取温度对提取脱氧野尻霉素的影响  42-43
    3.4 提取时间对提取脱氧野尻霉素的影响  43-44
    3.5 pH值对提取脱氧野尻霉素的影响  44
    3.6 料液比对提取脱氧野尻霉素的影响  44-45
    3.7 正交试验结果  45-47
  4 讨论  47-48
第五章 脱氧野尻霉素的初步分离  48-61
  1 前言  48
  2 材料与方法  48-53
    2.1 试验材料  48
    2.2 试验试剂  48-49
    2.4 试验方法  49-53
      2.4.1 大孔树脂柱层析  49-52
      2.4.2 聚酰胺柱层析  52-53
  3 结果与分析  53-59
    3.1 不同型号大孔树脂对DNJ的吸附和解吸情况  53-54
    3.2 静态吸附曲线的绘制  54
    3.3 pH值对吸附作用的影响  54-55
    3.4 原液浓度对吸附率的影响  55-56
    3.5 洗脱剂的选择  56-57
    3.6 上样流速的考察  57-58
    3.7 解吸剂的流速的影响  58-59
    3.8 纯度分析  59
  4 讨论  59-61
第六章 D370阳离子对DNJ的纯化工艺研究  61-68
  1 前言  61
  2 材料与方法  61-63
    2.1 试验材料  61
    2.2 试验试剂  61
    2.3 试验仪器  61-62
    2.4 试验方法  62-63
      2.4.1 树脂的预处理  62
      2.4.2 静态吸附量的确定  62
      2.4.3 上柱条件的选择  62-63
      2.4.4 洗脱条件的选择  63
      2.4.5 经过阳离子子交换树脂精制后DNJ的纯度  63
  3 结果与分析  63-67
    3.1 静态吸附量的确定  63
    3.2 上柱条件的选择  63-65
    3.3 洗脱条件的选择  65-67
    3.4 DNJ纯度分析  67
  4 讨论  67-68
第七章 结论及创新点  68-70
  1 结论  68
  2 创新点  68-70
参考文献  70-73
致谢  73-74
作者简历  74
在读期间发表论文  74

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中图分类: > 生物科学 > 植物学 > 植物生物化学
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