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四个STR基因座荧光标记复合扩增的研究及其法医学应用

作　者: 刘莉
导　师: 李英碧
学　校: 四川大学
专　业: 法医物证
关键词: 法医学 DNA分型短串联重复序列(STR) 聚合酶链式反应(PCR) 复合扩增荧光标记毛细管电泳荧光检测自动分析法群体遗传学
分类号: D919
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

目的本课题旨在建立已有群体遗传学数据的STR基因座D11S4951、D7S3062、GATA168F06和D10S1426基因座的荧光标记复合扩增体系。按照美国DNA分析方法技术工作组(The Technology Working Group on DNA Analysis Methods，TWGDAM)的指导方案进行法医学实用性研究。方法要首先对多个本实验室做过群体遗传学研究的STR基因座进行筛选，从中获得四个多态性好、个人识别机率高，扩增产物长度片段有区别的四个STR基因座，即D11S4951、D7S3062、GATA168F06、D10S1426，利用传统的复合扩增方法，ABI-310毛细管电泳仪进行荧光标记复合扩增的研究。并对复合扩增体系的灵敏度和准确度，不同扩增循环次数和热启动下复合扩增的效果等进行了研究。按照TWGDAM指导方案的基本要求，对该体系进行了法医学实用性研究，包括基因座的种属特异性，组织同一性及可重复性。结果成功建立了D11S4951、D7S3062、GATA168F06和D10S1426的荧光标记复合扩增体系。而且，这一扩增体系条件易于优化，采用国产Taq酶，不需要热启动进行扩增，即可得到满意的扩增产物和分型结果。相对于国外昂贵的试剂盒，是一种成本低廉但效率高的STR基因座复合扩增体系。法医学应用性研究表明，该体系的检测灵敏度为0.25ng模板DNA，四个STR基因座具有较高的种属特异性，对同一个体的不同组织检测结果一致，对常见基质上的检材及混合样本具有检测能力。对15个实际检案样本的检测证明，该体系能用于法医学个人识别和亲权鉴定。结论D11S4951、D7S3062、GATA168F06和D10S1426的荧光标记复合扩增体系可应用ABI-310检测平台，获得可靠的分型结果。法医学应用性研究证明，该体系扩增条件易于优化、成本低廉、分型结果稳定，灵敏度和准确度高，种属特异性好，重复性好，对陈旧斑痕具有检测能力，能够对常见基质上的斑痕以及混合斑痕正确分型，与常见的动物及微生物无交叉反应，可以应用于法医学实际检案。

全文目录

中文摘要  3-5
英文摘要  5-8
前言  8-10
材料与方法  10-18
结果  18-43
讨论  43-50
结论  50-51
论文参考文献  51-55
文献综述 STR基因座荧光复合扩增的研究  55-70
附录1 Chelex-100法提取DNA  70-72
附录2 经典酚-氯仿法提取DNA  72-73
附录3 紫外分光光度法测定DNA纯度及含量  73-74
附录4 PCR反应体系及反应参数  74-75
附录5 非变性连续缓冲体系聚丙烯酞胺凝胶电泳(PAGE)-银染显色  75-76
附录6 ABI310遗传分析仪的操作方法  76-80
致谢  80-81

四个STR基因座荧光标记复合扩增的研究及其法医学应用

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