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胡椒碱对白纹伊蚊C6/36细胞株增殖分裂的影响及毒性作用与凋亡关系的研究

作　者: 王玉芳
导　师: 诸葛洪祥
学　校: 苏州大学
专　业: 病原生物学
关键词: 白纹伊蚊胡椒碱 C6/36 细胞株细胞凋亡植物源杀虫剂
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
下　载: 82次
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内容摘要

目的研究植物型杀虫剂胡椒碱(piperine)对白纹伊蚊(Aedes albopictus )C6/36 细胞株增殖与核分裂的影响,细胞生长状态改变及受损细胞的恢复,引起的细胞毒性与诱导细胞凋亡的关系,从细胞水平上研究胡椒碱的毒性作用与作用机制,以便进一步比较其对蚊虫整体和微观细胞作用的联系与差别,进一步研究胡椒碱的杀虫活性,揭示其作用机制。方法采用冲击测试法测定胡椒碱对白纹伊蚊C6/36细胞株生长率及核分裂的影响,相差显微镜对细胞进行形态学观察,并观察受损细胞的恢复;MTT法研究胡椒碱对白纹伊蚊C6/36细胞株增殖的影响,Annexin V和PI双染流式细胞仪(FCM)检测法与Fas蛋白(又称APO-1,CD95,是一种传递细胞凋亡信号的Ⅰ型跨膜蛋白)的检测观察细胞凋亡,以及凋亡细胞与死亡细胞的比例,进一步研究胡椒碱对白纹伊蚊C6/36细胞株的毒性作用与作用方式。结果(1)胡椒碱浓度在0.035 mmol/L以上时可以诱发C6/36细胞形态学改变,在倒置显微镜下表现为细胞呈多形性,细胞胀大或皱缩,细胞间隙增宽,大片细胞聚集成团,脱落、崩解、死亡。低浓度胡椒碱(0.018mmol/ L)对C6/36细胞增殖没有影响;胡椒碱浓度为0.14 mmol/L时对C6/36细胞株生长率及核分裂产生影响,抑制细胞的生长;当处理浓度达到0.56 mmol/L时,抑制细胞生长的作用十分明显,细胞须经过一段短暂的停滞期方能再缓慢恢复分裂生长。高浓度胡椒碱(0.56 mmol/L)分别作用于C6/36细胞24h和48h,在经历一段生长停滞后,24h组受损细胞均可缓慢恢复,而48h组细胞则出现不可逆性的损伤,表明胡椒碱对C6/36细胞的作用有时间依赖性,延长作用时间,药物对细胞的毒性作用增强。(2)用胡椒碱处理24h后,MTT法测试并采用统计学方法分析显示,胡椒碱对C6/36细胞的半数毒性浓度(LD50)为0.32 mmol/L,且毒性作用强度随着药物浓度增加而增强。Annexin V/PI双染法显示药物浓度在0.28 mmol/L以上诱导的细胞凋亡率增高,并且随着药物作用浓度的提高,细胞凋亡率也增高;药物浓度为0.56 mmol/L时凋亡率达19.4%,而药物引起的总的细胞的死亡为72.7%。Fas蛋白表达在药物浓度0.28mmol/L以上时有所上调,但不明显,以上均提示药物诱导的细胞凋亡在细胞毒性作用机制中不占主导地位。结论胡椒碱对白纹伊蚊C6/36细胞株有较强的毒性作用和生长抑制作用,可作为开发新型杀虫剂的重点研究对象;诱导细胞凋亡不是胡椒碱的主要作用机制。

全文目录

中文摘要  3-5
Abstract  5-8
引言  8-11
第一部分胡椒碱对白纹伊蚊 C6/36 细胞株增殖与核分裂的影响  11-19
  材料和方法  11-13
  结果  13-17
  讨论  17-19
第二部分胡椒碱引起的白纹伊蚊 C6/36 细胞株细胞毒性与细胞凋亡的关系  19-26
  材料和方法  19-21
  结果  21-24
  讨论  24-26
小结  26-27
参考文献  27-31
攻读学位期间公开发表的论著、论文  31-32
综述  32-46
缩写词表  46-47
致谢  47-48

胡椒碱对白纹伊蚊C6/36细胞株增殖分裂的影响及毒性作用与凋亡关系的研究

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