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阳离子脂质体介导TIMP-3基因瞬时表达对兔血管平滑肌细胞增殖迁移及凋亡的影响

作　者: 陈巾杰
导　师: 浦晓东
学　校: 福建医科大学
专　业: 内科学
关键词: 特异性金属蛋白酶组织抑制剂-3 血管平滑肌细胞 阳离子脂质体 基因转染 增殖 迁移 凋亡 再狭窄
分类号: R543
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要


目的通过阳离子脂质体介导含有TIMP-3基因的质粒转染体外兔血管平滑肌细胞,观察瞬时表达的TIMP-3对细胞增殖、迁移及凋亡的影响,讨论TIMP-3基因治疗冠心病支架治疗再狭窄(ISR)的前景。方法第一阶段:构建兔TIMP-3基因质粒表达载体。按照正常对照组、空质粒组、重组质粒载体组将72孔兔血管平滑肌细胞分为3组,每组又分为24小时、48小时、72小时3个亚组,每个亚组n =8;阳离子脂质体介导质粒分别转染相应组细胞,正常对照组无质粒加入。转染后24小时、48小时、72小时进行细胞计数、描绘细胞生长曲线;ELISA法测定细胞培养上清液中MMP-2含量;RT-PCR分析细胞TIMP-3mRNA水平。第二阶段:将24孔细胞分为3组进行基因转染,各组n =8。转染后48小时检测细胞凋亡率。第3阶段:细胞迁移实验在12个Transwell小室中进行。将稀释ECMgel等体积均匀涂于Transwell上室滤膜,成胶后分为3组进行基因转染,每组n =4。转染后在下室中加入等体积含高浓度血清细胞培养基,上室加入不含血清细胞培养基,温育48小时后,HE染色,计算迁移至ECMgel和滤膜外表面的细胞数,每张滤膜随机取5个视野。结果所有数据均通过SSPS12.0统计软件进行分析,以P <0.05认为结果有意义。正常对照组细胞数、MMP-2含量、TIMP-3mRNA表达情况、细胞凋亡率、迁移细胞数与空质粒组相比均无明显差别;重组质粒组细胞数、MMP-2含量、迁移细胞数与前两者相比明显减少,P〈0.05。重组质粒组TIMP-3mRNA表达呈强阳性,正常对照组与空质粒组相应碱基区域内未见明显条带;重组质粒组灰度比值及细胞凋亡率均明显高于前两者,P〈0.05。结论TIMP-3对体外血管平滑肌细胞具有显著抑制增殖、抑制迁移及促进细胞凋亡的作用;阳离子脂质体作为新型、高效转染介质对细胞生长无明显不良反应,使用安全,应用于TIMP-3基因治疗支架后再狭窄前景广阔。

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 心脏、血管（循环系）疾病 > 血管疾病
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