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一株产高温蛋白酶菌株的生物学特性研究

作　者: 孙晓玲
导　师: 刘东波
学　校: 东北师范大学
专　业: 微生物学
关键词: 芽孢杆菌 菌株鉴定 高温蛋白酶 发酵产酶条件 纯化
分类号: Q93
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
下　载: 171次
引　用: 2次
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内容摘要


从吉林省长白山梯云温泉边的土样中分离得到一株产高温蛋白酶的菌株。根据其形态学特征、生理生化特性及部分长度的16SrDNA序列的研究,初步鉴定该菌株为芽孢杆菌属的一个新菌株,命名为Bacillus sp. SD-05。将该菌株分别接种到6种不同的液体培养基中,发酵后测定其高温蛋白酶酶活,确定了最佳初始液体产酶培养基,即:干酪素0.5%,Mandel A盐10%,Mandel B盐1%,pH6.0。以初始液体产酶培养基为基础,对该菌株进行最佳产高温蛋白酶的条件进行优化,结果表明最佳产酶条件为:以0.5%干酪素为最佳碳、氮源;培养基的初始pH值为6.0;接种量为0.5%;培养温度为32℃;培养时间为24h。实验表明该菌所产高温蛋白酶的92.12%都分布在细胞膜上,是一种和细胞结合的酶。对其提取条件进行研究,结果表明:用60%的异丙醇浸提菌体2h,离心后菌体再用50mmol/L的PBS振摇提取20h,为该结合酶的最佳提取方法。将粗酶液进行了超滤,盐析、透析、Sephadex G-100凝胶层析和冷冻干燥,得到单一的高温蛋白酶组分。对该酶的性质研究表明,该酶的分子量为66000Da;最适反应温度为60℃,最适反应pH8.0;在温度30-60℃,pH6.0-11.0条件下较稳定。

全文目录


中文摘要  4-5
英文摘要  5-9
引言  9-23
  一、高温菌的简介  9-12
    （一） 高温菌的分布  9-10
    （二） 高温菌的耐热机制  10-11
    （三） 高温菌的应用  11
    （四） 高温菌的研究现状  11-12
  二、高温酶的研究进展  12-17
    （一） 高温酶的特点  12-13
    （二） 高温酶的耐热机制  13-14
    （三） 高温酶的获得  14-16
    （四） 高温酶的应用  16-17
    （五） 高温酶的研究现状  17
  三、高温蛋白酶的研究进展  17-22
    （一） 高温蛋白酶的分类  18
    （二） 高温蛋白酶的来源  18-19
    （三） 高温蛋白酶与中温蛋白酶酶学特征的差异  19
    （四） 微生物中高温蛋白酶的存在形式  19-20
    （五） 高温蛋白酶的提取和纯化  20-21
    （六） 高温蛋白酶的应用  21-22
  四、本论文的工作目的  22-23
第一节 产高温蛋白酶菌株 SD-05 的分离纯化与初步鉴定  23-34
  一、材料与方法  23-28
    1. 实验材料  23-25
    2. 分离纯化方法  25
    3. 菌种的鉴定  25-28
  二、结果分析  28-33
    1. 菌种的筛选纯化结果  28
    2. 菌株的生长温度测定  28-29
    3. 菌株的鉴定结果  29-33
  三、小结  33-34
第二节 SD-05 菌株最佳产高温蛋白酶条件的优化  34-43
  一、基础产酶培养基的选择  34-38
    （一） 材料与方法  34-37
      1. 实验材料  34-36
      2. 实验方法  36-37
    （二） 结果分析  37-38
      1. 6种液体培养基的产酶结果  37-38
      2. 基础产酶培养基的确定  38
    （三） 小结  38
  二、最佳产酶条件的优化  38-43
    （一） 材料与方法  38-39
      1. 实验材料  38-39
      2. 实验方法  39
    （二） 结果分析  39-42
      1. 干酪素的浓度对产酶的影响  39-40
      2. 不同接种量对产酶的影响  40
      3. 不同培养时间对产酶的影响  40-41
      4. 不同培养温度对产酶的影响  41
      5. 培养基起始pH值对产酶的影响  41-42
    （三） 小结  42-43
第三节 SD-05 菌株产高温蛋白酶的分离纯化  43-49
  一、高温蛋白酶的提取  43-46
    （一） 材料与方法  43-44
      1. 实验材料  43
      2. 实验方法  43-44
    （二） 结果分析  44-45
      1. 高温蛋白酶的分布  44
      2. 粗酶的提取方法  44-45
    （三） 小结  45-46
  二、高温蛋白酶的分离纯化  46-49
    （一） 材料与方法  46-47
      1. 实验材料  46
      2. 实验方法  46-47
    （二） 结果分析  47-48
      1. 蛋白质含量测定的标准曲线  47
      2. 高温蛋白酶的分离纯化结果  47-48
      3. 高温蛋白酶纯度鉴定  48
    （三） 小结  48-49
第四节 SD-05 菌株产高温蛋白酶部分性质研究  49-52
  一、材料与方法  49
    1. 实验材料  49
    2. 实验方法  49
  二、结果分析  49-51
    1. 纯化酶蛋白的相对分子量  49-50
    2. 反应温度对酶活力的影响酶  50
    3. 酶的热稳定性  50
    4. 反应pH 值对酶活力的影响  50-51
    5. 酶的pH 值稳定性  51
  三、小结  51-52
结论  52-53
参考文献  53-57
致谢  57

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中图分类: > 生物科学 > 微生物学
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