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胶体金技术在鸡白痢/鸡伤寒检疫和沙门氏菌O_9抗原检测中的应用研究

作　者: 曹春梅
导　师: 焦新安
学　校: 扬州大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 鸡白痢 鸡伤寒沙门氏菌 沙门氏菌O9抗原 胶体金免疫层析法(GlCA) 斑点免疫金渗滤法(DIGFA)
分类号: S854.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2004年
下　载: 332次
引　用: 3次
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内容摘要


胶体金技术是继同位素、荧光素、酶标记技术之后的一种新型标记技术，它具有快速、敏感、便捷、不需特殊设备、结果判断直观等优点。沙门氏菌是肠杆菌科中一种重要的人兽共患病病原菌，可引起人和动物的多种沙门氏菌病，而含有O9抗原的沙门氏菌在其中占据了重要的地位。伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌可引起人类严重的疾病；在动物疾病中，鸡白痢沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌引起的鸡伤寒和鸡白痢是鸡的常见多发性传染病，常给养禽业造成巨大的经济损失。本研究将免疫胶体金技术引入沙门氏菌和沙门氏菌病的诊断，建立了测定鸡白痢／鸡伤寒抗体的脂多糖（LPS）抗原夹心斑点免疫金渗滤法和双抗体夹心测定沙门氏菌O9抗原的胶体金免疫层析法。 1 斑点免疫金渗滤法快速检测鸡白痢／鸡伤寒抗体方法的建立及其初步应用研究 将鸡伤寒沙门氏菌Sg9 LPS抗原包被于渗滤盒检测区（T区），针对沙门氏菌O9抗原单克隆抗体3-47-0包被在质控区（C区），用胶体金标记鸡伤寒沙门氏菌LPS抗原，建立了一种抗原夹心法快速检测鸡白痢、鸡伤寒沙门氏菌抗体的斑点免疫金渗滤法（DIGFA）。阳性结果为C区和T区均出现清晰的红色圆点，阴性结果仅C区出现红色质控圆点。整个检测过程仅需5分钟。对鸡伤寒沙门氏菌感染鸡阳性血清进行DIGFA检测时，检测区和质控区均能出现清晰的红色斑点；对SPF鸡、大肠杆菌、新城疫病毒感染鸡血清进行检测时，仅在质控区出现清晰的红色扬州大学硕士论文斑点。DIGFA比两种玻板凝集试验（PAI，）有更高的灵敏度，人工感染鸡试验表明在感染后第7天即可从犯只鸡中的7只检测到抗体，在时间上早于PAT。722份现场血清样品的检疫结果表明，DIGFA的阳性检出率稍高于R钉，（阳性率:DIGFA，13 .3%; PAr，，12.7%;R汀2，12.3%），阳性样品抗体几何平均滴度DIGFA大于PAr法(P（0 .05）。这些结果表明DIGFA快速、灵敏、准确，为鸡伤寒和鸡白痢的检疫提供了一个新的有效手段。2胶体金免疫层析条快速检测沙门氏菌。，抗原方法的建立及其初步应用 本研究通过将抗沙门氏菌09抗原的特异性单克隆抗体4一7一7、羊抗鼠IgG，以条带状分别包被于硝酸纤维膜的检测区（T）和质控区（C），用胶体金标记另一株单抗3一47一0，并将其吸附于金标垫上，成功建立子决速、特异、灵敏的检测沙门氏菌09抗原的胶体金免疫层析试纸条（GICA）。该试纸条可检测含有场抗原的沙门氏菌，而不与其它沙门氏菌、肠杆菌科其他细菌和常见革兰氏阳性细菌反应。对鸡伤寒沙门氏菌599 LPS的最小检出量为0.15n岁条，对599菌液的最小检出量为ZX1护cFu/条。蛋品的人工污染试验显示，经增菌后免疫层析试纸条可检出1 cFu的肠炎沙门氏菌，在大肠杆菌与沙门氏菌比例为1000:1仍不干扰试纸条的检测。免疫层析试纸条可直接对鸡白痢发病鸡进行检测，对于细菌含量较少的带菌鸡或其它待测样品，只需经过选择性增菌后，即可进行瞬时检测。共对122只鸡进行了检测，试纸条鸡白痢沙门氏菌检出率为27.9%，与经典细菌分离鉴定法完全符合。市场采集的鸡蛋样品中试纸条沙门氏菌09抗原的检出率为1 .89%，与经典细菌分离鉴定法相比敏感度为100%，特异性为99.4%。上述结果表明，检测沙门氏菌场抗原的GICA法在医学和兽医学重要沙门氏菌病诊断方面有着潜在的广阔前景。

全文目录


中文摘要  2-4
英文摘要  4-6
目录  6-7
符号说明  7-8
综述 胶体金免疫检测技术应用进展  8-19
  1 胶体金的发现  8
  2 胶体金的制备  8-9
  3 胶体金作为标记物的特点  9-10
  4 胶体金免疫检测技术的两种主要模式  10-13
  5 以膜为固相载体胶体金免疫检测技术的新进展  13-16
  6 小结  16
  参考文献  16-19
第一章 斑点免疫金渗滤法快速检测鸡白痢／鸡伤寒抗体方法的建立及其应用研究  19-34
  1 材料与方法  19-23
  2 结果  23-30
  3 讨论  30-32
  参考文献  32-34
第二章 胶体金免疫层析条快速检测沙门氏菌O_9抗原方法的建立及其应用研究  34-48
  1 材料与方法  34-40
  2 结果  40-47
  3 讨论  47-48
参考文献  48-51
致谢  51-52
攻读学位期间发表的学术论文  52

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 兽医临床医学 > 兽医诊断学
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