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大鼠胰岛细胞门脉内移植及免疫抑制剂对胰岛细胞影响的实验研究

作　者: 蔡锦全
导　师: 谭建明
学　校: 第二军医大学
专　业: 外科学
关键词: 胰岛移植免疫抑制剂糖尿病细胞分离
分类号: R657.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2003年
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内容摘要

研究目的：1．探讨胰岛细胞分离、纯化方法及胰岛细胞移植物质量的鉴定方法。2．通过体外人和大鼠胰岛细胞培养及糖刺激胰岛素释放试验，探讨免疫抑制剂对人和大鼠胰岛细胞的毒性作用，旨在筛选适用于胰岛细胞移植的免疫抑制剂。3．建立大鼠胰岛细胞门脉内移植模型，在体外实验的基础上，选用对胰岛细胞无毒性作用的免疫抑制剂进行体内实验，旨在探讨应用于胰岛细胞移植的新型无激素免疫抑制剂治疗方案。为临床移植提供理论依据。研究方法：1．采用胆总管内逆行灌注胶原酶方法消化、分离胰岛，Ficoll400间断密度梯度方法纯化胰岛。2．采用DTZ染色、AO—PI双色荧光染色法及糖刺激胰岛素释放试验鉴定胰岛细胞移植物的纯度、活率和功能质量。3．通过人和大鼠胰岛细胞与不同免疫抑制剂分别共培养后的糖刺激胰岛素释放试验，ELISA检测培养液中胰岛素含量比较，以探讨免疫抑制剂对胰岛细胞的毒性作用。4．建立药物性大鼠糖尿病模型和大鼠胰岛细胞门脉内移植模型，应用新型免疫抑制剂FTY720和Rapamycin、常规免疫抑制剂FK506和MMF预防排斥反应，通过移植物存活期和维持正常血糖时间的比较探讨其对胰岛细胞移植的作用。结果：1．大鼠的胰腺经消化分离纯化后胰岛产量为450～720个胰岛／胰腺，平均为562±110个胰岛／胰腺，平均活率在95％以上，纯度在80％以上。胰岛素释放试验显示高糖刺激后胰岛素释放量为低糖的5.45倍，表明胰岛细胞功能良好。2．高浓度MMF和FK506均引起人和大鼠胰岛细胞胰岛素分泌明显减少，与对照组比较，具有显著性差异，p＜0.05。中低浓度MMF和FK506对人和大鼠胰岛细胞胰岛素释放无明显抑制作用。FTY720和Rapamycin对人和大鼠胰岛细胞胰岛素分泌无明显影响。3．FTY720+Rapamycin联合应用或中低剂量MMF和FKS06联合应用于大鼠胰岛细胞移植，均能明显延长胰岛细胞存活时间和正常血糖维持时间，与对照组比较，具有显著性差异，p＜0.05。结论：1．胶原酶胆管内逆行灌注消化、Ficoll400间断密度梯度纯化方法是分离大第二军医大学硕士学位论文鼠胰岛细胞的较好方法。2.DTZ染色、AO一PI双色荧光染色和糖刺激胰岛素释放试验三者相结合是鉴定胰岛细胞移植物质量的一种简单、可靠方法。3.中低剂量MMF和FKSO6不影响人和大鼠胰岛细胞胰岛素的分泌，高剂量MMF和FK506明显抑制胰岛素的分泌。4.FTY72O和Rapamycin对人和大鼠胰岛细胞胰岛素的分泌无明显影响。FTY720十Rap田mycin联合应用于大鼠胰岛细胞移植，能显著延长大鼠胰岛细胞的存活时间和正常血糖维持时间，表明FTY720和Rapamycin是胰岛细胞移植较理想的免疫抑制剂。FTY720和Rapamycin有可能作为临床胰岛细胞移植的主要免疫抑制剂使用。5.中低剂量MMF和FK506联合应用于大鼠胰岛细胞移植，亦能显著延长大鼠胰岛细胞存活时间和正常血糖维持时间，表明胰岛细胞移植时可使用中低剂量MMF和FK506。

全文目录

中英文名词对照  4-5
中文摘要  5-7
英文摘要  7-9
前言  9-11
第一部分成年大鼠胰岛细胞的分离与纯化  11-26
  一、引言  11
  二、材料与方法  11-16
  三、结果  16-22
  四、讨论  22-24
  五、参考文献  24-26
第二部分免疫抑制剂对胰岛细胞的毒性作用体外研究  26-41
  一、引言  26
  二、材料与方法  26-30
  三、结果  30-35
  四、讨论  35-38
  五、参考文献  38-41
第三部分同种异体大鼠门脉内胰岛细胞移植模型建立及免疫抑制剂延长胰岛细胞存活的作用  41-54
  一、引言  41
  二、材料与方法  41-45
  三、结果  45-50
  四、讨论  50-52
  五、参考文献  52-54
全文总结  54-55
综述  55-66
致谢  66

大鼠胰岛细胞门脉内移植及免疫抑制剂对胰岛细胞影响的实验研究

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