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壮骨镇痛胶囊含药和血浆对共育体系中破骨细胞活性及凋亡的影响的实验研究

作　者: 李永忠
导　师: 柳景红
学　校: 湖南中医药大学
专　业: 中医骨伤科学
关键词: 壮骨镇痛胶囊含药血浆乳腺癌骨转移瘤成骨细胞破骨细胞共育体系活性凋亡
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的：研究壮骨镇痛胶囊含药血浆对成骨细胞-破骨细胞共育体系中破骨细胞活性和破骨细胞凋亡的影响,从血浆药理学角度探讨壮骨镇痛胶囊防治恶性肿瘤骨转移的作用机制。方法：1.运用琼脂糖凝胶和孔径为0.45μm微孔滤膜建立平面式成骨细胞-破骨细胞共育体系。2.将8月龄SD大鼠(雌雄不限)分为壮骨镇痛胶囊灌胃组和生理盐水对照组,制备含药血浆和对照血浆。3.运用甲苯胺蓝染色法观察含药血浆对成骨细胞-破骨细胞共育体系中破骨细胞(OC)形成骨吸收陷窝的影响。4.运用重氮盐法检测含药血浆对成骨细胞-破骨细胞共育体系中OC分泌抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)的影响。5.倒置相差显微镜下观察和荧光显微镜下观察含药血浆对共育体系中破骨细胞存活和凋亡的影响。结果：1.经考马斯亮蓝法检测蛋白质弥散情况,显示：在8小时内,蛋白质可以从成骨细胞(OB)培养室经过隔膜弥散到破骨细胞(OC)培养室,表明平面式共育体系的建立是成功的。2.2.5%含药血浆共育组在成骨细胞-破骨细胞共育体系中所形成骨吸收陷窝的数目明显低于对照血浆共育组,其差异具有统计学意义(p<0.01)。3.2.5%含药血浆共育组在48h、72h、96h对成骨细胞-破骨细胞共育体系中OC分泌TRAP的量都小于对照血浆共育组且呈明显的时效关系,与对照血浆共育组比较,其差异具有统计学意义(p<0.01)。4.2.5%含药血浆共育组在48h、72h、96h对成骨细胞—破骨细胞共育体系中OC的存活数低于对照血浆共育组,OC的凋亡数高于对照血浆共育组且呈明显的时效关系,与对照血浆共育组比较,其差异具有统计学意义(p<0.01)。结论：壮骨镇痛胶囊含药血浆在成骨细胞-破骨细胞共育体系中能够明显抑制OC的活性和促进OC的凋亡。

全文目录

中文摘要  6-8
ABSTRACT  8-10
英文缩略表  10-11
引言  11-13
第一部分实验资料与方法  13-26
  1 实验材料  13-15
    1.1 实验动物  13
    1.2 实验药物  13
    1.3 主要试剂  13-14
    1.4 主要仪器  14-15
  2 实验方法  15-24
    2.1主要试剂配制方法  15-17
    2.2 薄骨片的制备与处理  17
    2.3 壮骨镇痛胶囊含药血浆的制备  17-18
    2.4 成骨细胞的分离、培养与鉴定  18-20
    2.5 破骨细胞的分离、培养与鉴定  20-21
    2.6 成骨细胞—破骨细胞平面式共育体系的建立  21-23
    2.7 壮骨镇痛胶囊含药血浆对共育体系中破骨细胞活性的影响  23
    2.8 壮骨镇痛胶囊含药血浆对共育体系中破骨细胞凋亡的影响  23-24
  3 统计学方法  24-26
第二部分结果分析  26-32
  1 成骨细胞的培养  26-27
    1.1 成骨细胞形态学观察  26
    1.2 成骨细胞碱性磷酸酶染色  26-27
  2 二组血浆对共育体系中TRAP的影响  27
  3 二组血浆对共育体系中骨吸收陷窝数的影响  27-28
  4 破骨细胞凋亡形态学观察  28-30
  5 两组血浆对共育体系中OC存活数的影响  30
  6 两组血浆对共育体系中OC凋亡数的影响  30-32
第三部分讨论  32-44
  1 中药血浆药理学方法探讨  32-33
  2 壮骨镇痛胶囊防治乳腺癌骨转移瘤的方解与探讨  33-40
    2.1 壮骨镇痛胶囊的方解  33-38
    2.2 壮骨镇痛胶囊含药血浆的制备  38
    2.3 中药壮骨镇痛胶囊治疗骨转移瘤的机理  38-39
    2.4 壮骨镇痛胶囊的临床应用探讨  39-40
  3 成骨细胞的来源与分离  40
  4 破骨细胞的来源与分离  40-41
  5 成骨细胞-破骨细胞共育体系探讨  41-42
  6 含药血浆对破骨细胞TRAP和骨吸收陷窝的影响  42
  7 两组血浆对共育体系中OC凋亡数的影响  42-44
结论  44-45
致谢  45-47
参考文献  47-50
课题资助  50-51
综述  51-61
  参考文献  58-61
攻读学位期间主要研究成果及发表论文  61

壮骨镇痛胶囊含药和血浆对共育体系中破骨细胞活性及凋亡的影响的实验研究

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