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Decorin在脑缺血防治中的功能及机制研究

作　者: 宋旭辉
导　师: 芮耀诚；杨鹏远
学　校: 第二军医大学
专　业: 药理学
关键词: 核心蛋白聚糖缺血再灌注内皮通透性紧密连接粘附分子
分类号: R743.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 37次
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内容摘要

目的：脑微血管内皮细胞不仅仅是血脑屏障最主要的组分,而且它通过产生和释放各种活性物质,调节血管的功能,维持正常血管自身稳定。缺血性脑卒中能引发内皮细胞的损伤,破坏血管内皮的完整性。因此血管内皮细胞损伤也被公认为是许多脑血管疾病的病理基础。本课题组通过前期大鼠全基因组芯片的方法比较大鼠脑微血管内皮和心脏微血管内皮差异表达的基因。发现核心蛋白聚糖(Decorin,DCN)特异高表达于脑微血管内皮细胞中,因此本研究拟探究脑微血管内皮内源性活性物质DCN在脑血管疾病中的作用,为脑血管疾病的防治提供新的思路。方法：通过构建腺病毒载体pAd-DCN-IRES2-EGFP,并通过Western blot和实时定量PCR方法检测体外脑微血管内皮细胞缺氧/复氧模型(缺氧培养(含95%N25%CO2)2h,再复氧(正常的细胞培养条件)24h)中DCN蛋白水平及mRNA水平的表达变化。Western blot方法检测大鼠中动脉栓塞模型缺血不同时间血清中DCN的表达,及脑梗病人血清中DCN的表达。脑血管内皮细胞缺氧/复氧模型中DCN对粘附分子及细胞外基质(ICAM-1,VCAM-1和MMP-2,MMP-9)的影响。实时定量PCR方法检测体外脑微血管内皮细胞缺氧/复氧损伤后紧密连接蛋白(tight junction protein):闭锁小带蛋白(zonula occludens protein)-Zo-1、Zo-2,咬合蛋白(occludin),闭合蛋白(claudins)的表达变化。结论：通过整体、细胞水平各种病理模型研究DCN在脑血管病中的功能,并从脑微血管通透性、脑微血管内皮粘附功能等方面研究发现DCN在脑微血管内皮特异表达,是脑微血管内皮细胞内源性的活性物质。在脑微血管内皮细胞缺氧/复氧模型中DCN的蛋白及mRNA水平表达显著增加,并在复氧24h后表达最高。因此,我们推测DCN参与脑缺血的病理生理过程。经尾静脉注射DCN后,DCN能显著降低脑缺血再灌注损伤引起的梗死面积(P<0.05),说明DCN对脑缺血及再灌注损伤具有一定的保护作用,其机制可能与DCN能浓度依赖性地降低粘附分ICAM-1,VCAM-1的表达,具有抗粘附的作用。此外,闭锁小带蛋白(ZO-1、Zo-2),咬合蛋白(occluding)在缺氧2h,复氧24h培养后表达开始降低,闭合蛋白(claudin-1)复氧48h后表达开始降低。而DCN预处理组中,Zo-1,Zo-2,occludin和claudin-1分别较之前增强了对缺氧的耐受性,降低了内皮细胞的通透性,这可能与DCN能浓度依赖性地降低基质金属蛋白酶MMP-2,MMP-9有密切关系,可以防止脑微血管内皮细胞之间紧密连接蛋白(tight junction protein)的蛋白水解作用。因此,在生理和病理条件下,DCN作为脑微血管内皮细胞特异地内源性活性物质具有抗粘附,降低内皮细胞的通透性,抑制炎症反应,对维持内皮完整性发挥重要作用。

全文目录

中文摘要  5-6
英文摘要  6-8
缩略词表  8-9
前言  9-11
第一部分 DCN在脑缺血再灌注损伤中的表达变化  11-41
  一、材料与方法  11-32
  二、实验结果  32-39
  三、讨论  39-41
第二部分 DCN对缺氧/复氧致脑血管内皮细胞损伤的保护作用及机制  41-65
  一、实验材料和方法  41-52
  二、实验结果  52-62
  三、讨论  62-65
全文总结  65-66
参考文献  66-70
综述  70-76
  参考文献  73-76
在读期间发表论文和参加科研工作情况  76-77
致谢  77

Decorin在脑缺血防治中的功能及机制研究

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