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siRNA介导的RhoA基因沉默对肝癌HepG2细胞增殖和迁移能力的影响

作　者: 董伟
导　师: 窦科峰；王德盛
学　校: 第四军医大学
专　业: 外科学
关键词: RhoA 小干扰RNA 肝癌细胞增殖细胞迁移
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 60次
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内容摘要

原发性肝癌是一种常见的全球性的恶性肿瘤,往往最终导致患者死亡。其发病原因包含多种因素,共同作用下最终导致恶性肿瘤发作。原发性肝癌预后较差,每年因此而死亡的人数在60万左右,严重威胁人类的健康。目前国内外的最佳治疗手段是手术切除肿瘤。随着肝移植技术的发展,肝移植已成功应用于早期原发性肝癌的治疗。近年来诊断与治疗技术的不断进展,原发性肝癌患者的长期生存率已经有所改善,但是预后仍然不能令人满意。其预后不良与肿瘤的侵袭转移密切相关。因此有必要对肝癌的侵袭及转移机制进行深入研究。Rho蛋白酶参与多种影响肿瘤进程的细胞功能调节,包括调节细胞骨架、细胞周期、转录调控、细胞生存、细胞迁移等。作为Rho家族的重要成员之一,RhoA几乎与肿瘤发生发展的所有进程相关。本实验以肝癌HepG2细胞为研究对象,将针对RhoA的siRNA转染入HepG2细胞后,研究其肿瘤生物学行为的改变。目的:本研究旨在构建RhoA-siRNA表达载体,研究其对肝癌HepG2细胞RhoA蛋白表达水平的影响,及在RhoA-siRNA表达载体转染肝癌HepG2细胞后增殖及迁移能力的改变。方法:常规进行HepG2细胞的培养。利用pGenesil-1载体构建RhoA-siRNA表达载体,以脂质体法转染至肝癌HepG2细胞中并建立稳定细胞系。Western blot方法检测RhoA-siRNA对RhoA蛋白表达的抑制情况。分别采用MTT法、细胞划痕损伤和平板克隆形成实验检测转染细胞的增殖、迁移和生长潜能,流式细胞术检测细胞周期变化。采用单因素方差分析和χ2检验比较各组差异。结果:RhoA-siRNA明显下调RhoA蛋白的表达。RhoA基因沉默显著抑制HepG2细胞的增殖,细胞周期中G0/G1期细胞数量增多而S期细胞数量减少(P<0.05)。两对照组细胞划痕损伤在48h内愈合,而RNAi组则不能愈合,RNAi组与肝癌HepG2组和阴性对照组克隆形成率分别为38.5%±3.0%、67.0%±4.5%、69.5%±6.0%,与两对照组相比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:RhoA-siRNA表达载体能显著下调肝癌HepG2细胞RhoA蛋白水平的表达,RhoA表达下调后,抑制肝癌HepG2细胞的增殖和迁移,可为肝癌的基因治疗提供新的方法。

全文目录

缩略语表  5-7
中文摘要  7-9
英文摘要  9-12
前言  12-14
文献回顾  14-30
正文  30-49
  第一部分 HepG2 细胞的培养及siRNA载体的构建  30-35
    1 前言  30
    2 材料  30-31
    3 方法  31-33
    4 结果  33-34
    5 讨论  34-35
  第二部分特异性siRNA对肝癌HepG2 细胞RhoA表达的影响  35-42
    1 前言  35
    2 材料  35-36
    3 方法  36-39
    4 结果  39-40
    5 讨论  40-42
  第三部分 siRNA沉默RhoA基因对肝癌HepG2 细胞增殖及迁移能力的影响  42-49
    1 前言  42
    2 材料  42-43
    3 方法  43-44
    4 结果  44-46
    5 讨论  46-49
小结  49-50
参考文献  50-61
附录  61-63
个人简历和研究成果  63-64
致谢  64

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肝肿瘤
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