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正红菇菌丝体凝集素的分离纯化与性质研究

作　者: 黄维雅
导　师: 黄建忠；刘艳如
学　校: 福建师范大学
专　业: 微生物学
关键词: 正红菇菌丝体 凝集素 分离纯化 性质 抑菌活性
分类号: S567.39
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


本研究采用响应面法对液体深层培养的正红菇(Russula vinosa)菌丝体产胞内凝集素的培养条件进行了优化,确定了产凝集素的最适条件：淀粉3.04%,酵母粉0.3%,KH2PO40.2%, MgSO40.1%,装液量73 mL,转速250 r/min,初始pH 5,发酵时间5 d。在此条件下,菌丝体产胞内凝集素的总活力可达72127.3,与初始培养条件下的凝集素总活力25044.2相比提高了1.88倍。正红菇菌丝体经PB抽提,硫酸铵沉淀,DEAE-Sepharose FF离子交换层析和Sephadex G-100分子筛层析纯化得到一种凝集素(Russula vinosa Lectin简称RVL)。RVL的比活性比粗提液提高了73.3倍,活力回收率达54.4%。经SephadexG-100测得RVL的相对分子质量约为55kD。RVL在SDS-PAGE上显示单一的蛋白带,只含一个亚基。对RVL理化性质和部分生物学活性进行了研究。结果表明,RVL是一种糖蛋白,其中性糖含量为3.87%；以兔红细胞检测凝集活性,凝集活性在20-60℃温度范围内保持稳定；pH在5-9的范围内,RVL的凝集活性保持相对的稳定；RVL对Mn2+、Zn2+、Ca2+有不同程度的依赖作用；对糖的专一性研究表明,D-甘露糖是RVL的专一性抑制糖,蔗糖、D-半乳糖、N-乙酰-D-氨基葡萄糖在一定程度上对凝集活性有抑制作用；RVL的氨基酸组成分析显示,RVL中含有15种氨基酸,其中组氨酸的含量最高,不含有精氨酸和脯氨酸。抑菌实验显示,RVL对供试的细菌都没有抑制作用,对供试的部分真菌(红色面包霉、绿色木霉、稻瘟病菌、黑曲霉)菌丝生长有一定的抑制作用；对黑曲霉、绿色木霉、黄曲霉和稻瘟病菌孢子的萌发也没有显著的抑制作用。

全文目录


摘要  2-3
Abstract  3-4
中文文摘  4-6
目录  6-9
绪论  9-25
  第一节 凝集素的研究概况  9-18
    1.1 凝集素的定义及分布  9
    1.2 凝集素的结构  9
    1.3 凝集素的分类  9-11
    1.4 凝集素的分离纯化  11-13
    1.5 凝集素的性质  13-16
    1.6 凝集素的应用  16-18
  第二节 大型真菌凝集素的研究概况  18-20
    2.1 大型真菌凝集素的研究进展  18-20
    2.2 大型真菌凝集素的发展前景  20
  第三节 红菇的研究进展  20-23
    3.1 红菇的分布及生态环境  21-22
    3.2 红菇的营养及药用价值  22-23
  第四节 课题研究的目的和意义  23-25
第一章 响应面法优化正红菇菌丝体产胞内凝集素培养条件  25-43
  第一节 材料与方法  26-28
    1.1 实验材料  26
    1.2 实验方法  26-28
  第二节 结果与分析  28-40
    2.1 红菇菌丝体胞内凝集素提取  28-29
    2.2 蛋白质含量测定  29
    2.3 单因素实验  29-30
    2.4 Plackett-Burrman设计筛选影响总活力的主要因素  30-33
    2.5 最陡爬坡实验确定主要因素水平中心点  33-34
    2.6 响应面实验设计确定主要因素的最优水平  34-40
    2.7 最优发酵配方组合的验证  40
  第三节 小结与讨论  40-43
第二章 正红菇菌丝体凝集素(RVL)的分离纯化  43-53
  第一节 材料与方法  43-46
    1.1 实验材料  43-44
    1.2 实验方法  44-46
  第二节 结果与分析  46-50
    2.1 DEAE-Sepharose FF离子交换层析  46-47
    2.2 Sephadex G-100分子筛层析  47-48
    2.3 纯度检测及亚基相对分子质量  48-49
    2.4 纯化回收率  49-50
  第三节 小结与讨论  50-53
第三章 正红菇菌丝体凝集素(RVL)的理化性质及部分生物学活性  53-69
  第一节 材料与方法  53-58
    1.1 实验材料  53-54
    1.2 实验方法  54-58
  第二节 结果与分析  58-67
    2.1 RVL的热稳定性  58-59
    2.2 RVL的酸碱稳定性  59-60
    2.3 金属离子对RVL血凝活力的影响  60
    2.4 糖对RVL血凝活力的影响  60-61
    2.5 RVL中性糖含量  61-62
    2.6 RVL氨基酸组成  62
    2.7 RVL对细菌生长的影响  62
    2.8 RVL对真菌孢子萌发的影响  62
    2.9 RVL对真菌菌丝生长的影响  62-67
  第三节 小结与讨论  67-69
结论  69-71
参考文献  71-79
攻读学位期间承担的科研任务与主要成果  79-81
致谢  81-83
个人简历  83

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中图分类: > 农业科学 > 农作物 > 经济作物 > 药用作物 > 菌类 > 其他
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