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胸腺五肽抗肿瘤和抗氧化作用的研究

作　者: 常惠
导　师: 陈强
学　校: 兰州大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 胸腺五肽白血病细胞联合作用细胞增殖细胞凋亡细胞分化心肌羟自由基过氧化氢 PC12细胞
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

胸腺五肽（Thymopentin，TP5，Arg-Lys-Asp-Val-Tyr）是人工合成的在人体内具有免疫调节活性的五肽。本文主要研究TP5与化疗药物联合使用时在体外对人白血病细胞株HL—60细胞和K562细胞增殖与分化的影响。应用生长曲线测定法检测TP5与DMSO（二甲基亚砜）联合作用对人早幼粒白血病细胞株HL-60细胞增殖的影响以及TP5与ADM（阿霉素）联合作用对人慢性髓系白血病细胞株K562细胞增殖的影响；根据硝基蓝四氮唑（NBT）还原能力来测定白血病细胞的分化；用流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化以及凋亡相关基因Bcl-2和CD95的表达。结果表明，TP5与DMSO联合应用对HL60细胞增殖有协同抑制作用，TP5能显著增强DMSO对HL60细胞的NBT还原能力，流式细胞仪检测发现TP5与DMSO联合应用诱导HL-60细胞发生凋亡；此外，TP5与ADM联合应用对K562细胞增殖有协同抑制作用，TP5能显著增强ADM对K562细胞的NBT还原能力，瑞氏-姬姆萨染色细胞结果显示TP5与ADM联合应用使K562细胞形态发生显著变化，形态学结果表明K562细胞的分化增强。这些结果表明，TP5不但可以作为肿瘤化疗过程中的免疫调节剂，还可以作为一种潜在的白血病化疗药物。本实验中我们还研究了TP5对外源羟自由基致大鼠心肌细胞损伤的作用。采用由Fenton体系产生的羟自由基损伤心肌细胞，MTT法检测细胞活力。结果显示，TP5对外源羟自由基致大鼠心肌细胞损伤具有显著的保护作用，这种保护作用可能是通过TP5对自由基的清除实现的。我们还研究了TP5对H₂O₂致PC12细胞损伤的作用。结果显示TP5可以浓度依赖的显著削弱H₂O₂（0.5mmol／L）对PC12细胞的损伤作用。推测TP5在神经系统损伤修复中发挥重要作用。

全文目录

中文摘要  6-7
英文摘要  7-8
前言  8-25
  1 胸腺五肽的研究和应用现状  8-16
    1.1 胸腺五肽的发现  8
    1.2 TP5的生物学作用  8-11
    1.3 TP5给药方式对其生物活性的影响  11
    1.4 TP5的代谢特点及毒副作用  11-12
    1.5 TP5的临床应用  12-16
  2 白血病的实验研究  16-20
    2.1 白血病  16-17
    2.2 细胞分化  17
    2.3 细胞凋亡  17-20
  3 心肌细胞  20-22
    3.1 原代心肌细胞的培养  20-21
    3.2 氧化损伤  21-22
  4 PC12细胞  22-25
立题依据与研究目的  25-26
材料与方法  26-36
  1 主要试剂:  26
  2 溶液配制:  26-28
  3 主要实验仪器  28
  4 实验方法:  28-32
    4.1 细胞培养:  28-30
    4.2.DMSO对HL60细胞增殖的抑制作用  30
    4.3 TP5联合DMSO对HL-60细胞增殖的作用  30
    4.4 ADM对K562细胞增殖的抑制作用  30-31
    4.5.TP5联合ADM对K562细胞增殖的作用  31
    4.6 Fenton损伤体系致心肌细胞损伤和TP5对其氧化损伤保护的药物处理方法  31-32
    4.7 H_2O_2致PC12细胞凋亡模型的制备和药物处理方法  32
  5 测定方法  32-36
    5.1 MTT法测定细胞存活率  32-33
    5.2 细胞增殖能力测定  33
    5.3 瑞氏染色(Wright's)-姬姆萨(Giemsa's)混合染色观察细胞形态  33-34
    5.4 NBT还原实验  34
    5.5 流式细胞仪检测细胞凋亡率  34
    5.6 流式细胞仪检测细胞Bcl-2的表达  34-35
    5.7 流式细胞仪检测细胞CD95的表达  35
    5.8 统计方法  35-36
结果  36-59
  1 TP5联合DMSO对HL-60细胞的作用  36-44
    1.1 DMSO抑制HL-60细胞的增殖  36-37
    1.2 TP5联合DMSO对HL-60细胞增殖的作用  37-39
    1.3 NBT还原能力检测TP5联合DMSO对HL-60细胞分化的影响  39-40
    1.4 TP5联合DMSO对HL-60细胞的诱导凋亡作用  40-42
    1.5 TP5联合DMSO作用引起的HL-60细胞蛋白表达水平的变化  42-44
  2 TP5联合ADM对K562细胞的作用  44-55
    2.1 ADM抑制K562细胞的增殖  44-45
    2.2 TP5联合ADM对K562细胞增殖的作用  45-47
    2.3 NBT还原能力检测TP5联合ADM对K562细胞分化的影响  47-52
    2.4 TP5联合ADM对K562细胞形态的影响  52-55
  3 TP5对FENTON体系致心肌细胞损伤的保护作用  55-57
    3.1 Fenton体系致心肌细胞损伤  55-56
    3.2 TP5对Fenton体系致心肌细胞损伤的保护作用的MTT测定值  56-57
  4 TP5对H_2O_2致PC12细胞损伤的保护作用  57-59
    4.1 H_2O_2致PC12细胞损伤作用  57-58
    4.2 TP5对H_2O_2致PC12细胞损伤的保护作用的MTT测定值  58-59
讨论  59-63
结论  63-64
参考文献  64-71
个人简历及在学期间的研究成果  71-72
致谢  72

胸腺五肽抗肿瘤和抗氧化作用的研究

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