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细胞外RNA的初步克隆分析及miRNA-483前体相互作用蛋白的筛选

作　者: 焦虎平
导　师: 郑晓飞
学　校: 中国人民解放军军事医学科学院
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 细胞外RNA RNA酶酵母三杂交微RNA
分类号: Q78
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

RNA广泛存在于生命活动的各个过程，并在其中发挥着重要的功能。但是，人们对细胞外RNA(extracellular RNA，eRNA)还知之甚少。microRNA(miRNA)的发现使我们对基因表达调控有了一个全新的认识，但是miRNA前体的加工途径的精细过程还不是很清楚。为了探索细胞外RNA的生物学功能，本研究以HepG2细胞为研究模型，通过RNA酶A的对细胞的离散作用及RNA抗体的细胞免疫荧光实验验证了细胞表面RNA分子的存在，研究了细胞培养液中RNA含量的变化。通过冻干法富集了细胞培养液中的RNA，并采用本室建立的RNA克隆方法对其进行了克隆。同时我们利用酵母三杂交技术筛选了本室克隆出的新的microRNA—48前体的相互作用蛋白。本研究取得的具体进展如下：1．用RNA抗体细胞免疫荧光检测，证实了HepG2细胞表面存在RNA分子。2．发现RNA酶A能使HepG2细胞离散，迁移能力增强，细胞表面伪足增加。3．检测了HepG2细胞生长过程中培养液中和细胞表面RNA含量的变化。4．建立了冻干浓缩提取细胞培养液中RNA的方法，并建立了细胞培养液RNA克隆方法，得到了若干条细胞培养液中的RNA，其中包括rRNA片段、人延伸因子1α亚单位、线粒体RNA片段和立克次氏体RNA，其中一条位于15号染色体CpG岛区的28nt的RNA与新发现的piRNA有很高的相似性。5．用酵母三杂交技术得到了microRNA-483前体候选相互作用蛋白，其中C14OFR108和ZNF43得到了回转验证。RNA在生命活动中的作用已经得到了人们的认可。细胞外RNA的研究也已经初见端倪，本研究以证实了细胞外RNA的存在，建立了细胞外液RNA的提取和克隆方法，获得了一些有特点的RNA；为细胞外RNA的研究建立了新的方法，。可以用于疾病的检测，同时为深入研究RNA在生命活动过程中的作用奠定了良好的基础。通过酵母三杂交技术筛选了与microRNA—483相互作用的蛋白质，为microRNA-483的加工机制研究提供了线索，同时为microRNA功能的研究提供了新的思路。

全文目录

目录  4-5
英文缩略语表  5-6
中文摘要  6-7
英文摘要  7-9
前言  9-15
  一细胞外RNA的研究进展  9-11
  二 miRNA加工研究进展  11-12
  参考文献  12-15
第一部分细胞外RNA存在的验证及细胞培养液中RNA定量分析  15-28
  实验材料  15-16
  实验方法  16-19
  实验结果  19-25
  讨论  25-26
  小结  26
  参考文献  26-28
第二部分细胞外液RNA的初步克隆分析  28-42
  实验材料  28-29
  实验方法  29-34
  实验结果  34-38
  讨论  38-39
  小结  39
  参考文献  39-42
第三部分酵母三杂交技术筛选miRNA-483前体相互作用蛋白  42-59
  实验材料  42-45
  实验方法  45-52
  实验结果  52-55
  讨论  55-56
  小结  56
  参考文献  56-59
总结  59-60
致谢  60-61
已发表文章  61-62
附录  62-63
综述  63-71

细胞外RNA的初步克隆分析及miRNA-483前体相互作用蛋白的筛选

内容摘要

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