学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

可溶性壳聚糖季铵盐（CSTM）的合成、表征及其在基因载体和MR分子探针中的应用

作　者: 王江峰
导　师: 钟延强；鲁莹
学　校: 第二军医大学
专　业: 药剂学
关键词: 壳聚糖季铵盐 基因传递 转染效率 靶向纳米粒 CSTM/TPP-SPIO分子探针 T1加权
分类号: TQ461
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 95次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


为筛选具有更佳性能的纳米粒载体材料,本课题对天然可生物降解高分子材料——壳聚糖进行结构修饰,以修饰产物壳聚糖季铵盐(CSTM)、壳聚糖季铵盐-g-聚乙二醇-叶酸(CSTM-g-PEG-FA/pDNA)为材料制备了载基因纳米粒和CSTM/TPP-SPIO MR分子探针并对其特性进行了系列研究。本课题第一部分完成了壳聚糖季铵盐和壳聚糖季铵盐-g-聚乙二醇-叶酸纳米材料的制备。首先将壳聚糖与甲基丙烯酰氧乙基三甲基氯化铵反应,将壳聚糖修饰成可溶性壳聚糖季铵盐,然后在此基础上进一步用叶酸和PEG来修饰壳聚糖季铵盐得到CSTM-g-PEG-FA。用IR和1H-NMR对聚合物进行结构鉴定,TM和PEG-FA的特征峰明显。本课题第二部分进行了壳聚糖季铵盐-g-聚乙二醇-叶酸载基因纳米粒的制备及形态学表征。首先采用自组装法制备了CSTM/pDNA纳米复合物和CSTM-g-PEG- FA/pDNA纳米复合物,然后通过不同介质溶液、有无血清、不同N/P等因素对两纳米复合物的粒径和zeta电位分别进行考察,实验结果证明在水溶液中能够得到粒径在200nm以内、粒径分布均匀、形态圆整、zeta电位高的纳米复合物。凝胶阻滞实验中发现,当聚合物/pNDA的N/P大于等于5时,两种纳米复合物都能完全包裹pNDA,而且两种壳聚糖衍生物都能很好保护pNDA不受酶降解。本课题第三部分从细胞毒性和转染效率两个方面进行了两种纳米复合物的体外细胞实验。选择叶酸受体高表达的293T细胞株,通过MTT比色法测定两种壳聚糖衍生物以及两种纳米制剂的细胞毒性,结果显示无论是两种壳聚糖衍生物还是两种纳米制剂的细胞存活率均在70%以上,说明合成的CSTM和CSTM-g-PEG-FA材料具有良好的安全性。在细胞转染实验中,CSTM/pDNA纳米粒和CSTM-g-PEG-FA/pDNA纳米粒都有较高的转染效率,且CSTM-g-PEG-FA/pDNA纳米粒的转染效率要高于CSTM/pDNA纳米粒,证明CSTM-g-PEG-FA/pDNA纳米粒具有一定的细胞靶向性。本课题第四部分制备了CSTM/TPP-SPIO分子探针。采用凝聚法制备CSTM/TPP空白纳米粒,然后与SPIO结合生成CSTM/TPP-SPIO分子探针。CSTM/TPP-SPIO分子探针的粒径在200~280nm之间,zeta电位在10.0~16.0mv之间。SPIO的包封率在80%以上。本课题第五部分进行了CSTM/TPP-SPIO分子探针的体外毒性实验和动物体内淋巴结病变定性诊断实验。在体外细胞实验中,应用CSTM/TPP-SPIO分子探针后HepG2肝癌细胞存活率都在80%以上,表明CSTM/TPP-SPIO分子探针是一种安全低毒的纳米制剂。淋巴结病变定性诊断实验的结果显示,家兔给予CSTM/TPP-SPIO分子探针24hr后MR影像下T1WI信号较处理前明显增强,说明CSTM/TPP-SPIO分子探针能够在病变淋巴结中分布,对于于病变淋巴结的临床诊断和肿瘤转移的诊断与治疗具有重要意义。

全文目录


中文摘要  9-11
英文摘要  11-13
缩略词表  13-15
前言  15-20
  一、 壳聚糖季铵盐载基因纳米粒  15-17
  二、 壳聚糖季铵盐MR分子探针在淋巴结病变定性诊断中的应用  17-20
第一部分壳聚糖季铵盐及壳聚糖季铵盐-g-聚乙二醇-叶酸的制备  20-28
  一、材料与仪器  20-21
    （一） 药品和试剂  20-21
    （二） 仪器  21
  二、实验方法  21-24
    （一） 壳聚糖季铵盐的合成  21-22
    （二） 壳聚糖季铵盐-g-聚乙二醇-叶酸的合成  22-24
      1、叶酸活性酯的制备  22
      2、COOH-PEG-FA 的制备  22-24
      3、FA-PEG-COOH的活化  24
      4、CSTM-g-PEG-FA的合成  24
  三、实验结果  24-27
    （一） ~1H-NMR 的鉴定和分析  24
    （二） IR的鉴定和分析  24-27
  四、讨论与小结  27-28
第二部分 壳聚糖季铵盐载基因纳米粒的制备及形态学表征  28-47
  一、材料与仪器  28-29
    （一） 药品和试剂  28-29
    （二） 仪器  29
  二、 实验方法  29-32
    （一） 质粒的扩增  29
    （二） 载基因纳米粒的制备  29-30
      1、CSTM/pDNA 纳米复合物的制  30
      2、CSTM-g-PEG-FA/pDNA 纳米复合物的制备  30
    （三） 载基因纳米粒的表征  30-32
      1、载基因纳米粒包封率的测定  30
      2、载基因纳米粒粒径的测定  30
      3、载基因纳米粒 Zeta 电位的测定  30
      4、透射电镜观察纳米粒形态  30-31
      5、血清对载基因纳米粒的影响  31
      6、DNaseⅠ消化法测定纳米粒的稳定性  31
      7、载基因纳米粒粒径随时间变化  31-32
  三、实验结果  32-45
    （一） 包封率测定结果  32-34
      1. CSTM 对质粒 DNA 包封率测定结果  32
      2. CSTM-g-PEG-FA 对质粒 DNA 包封率测定结果  32-34
    （二） 载基因纳米粒粒径测定结果  34-37
      1、 DI 水中制得纳米粒粒径  34-36
      2、PBS 中制得纳米粒粒径  36-37
    （三） 载基因纳米粒zeta 电位测定结果  37-40
      1、DI 水中制得纳米粒zeta 电位值  37-39
      2、PBS 中制得纳米粒zeta 电位值  39-40
    （四） TEM 观察纳米粒形态结果  40-41
    （五） DNaseⅠ消化法考察纳米粒稳定性的结果  41-44
    （六） 血清对载基因纳米粒粒径影响的结果  44
    （七） 载基因纳米粒粒径随时间变化结果  44-45
  四、讨论与小结  45-47
第三部分 壳聚糖季铵盐载基因纳米粒体外细胞实验  47-55
  一、材料与仪器  47-48
    （一） 药品和试剂  47-48
    （二） 仪器  48
  二、实验方法  48-50
    （一） 293T 细胞的培养  48
    （二） 细胞毒性实验  48-49
    （三） 细胞转染实验  49-50
  三、实验结果  50-53
    （一） 细胞转染结果  50-52
      1、细胞转染荧光显微镜结果  50-51
      2、细胞转染流式定量结果  51-52
    （二） 细胞毒性测定结果  52-53
  四、讨论和小结  53-55
第四部分 壳聚糖季铵盐-SPIO 分子探针的研制  55-63
  一、材料与仪器  55-56
    （一） 药品和试剂  55
    （二） 仪器  55-56
  二、实验方法  56-57
    （一） CSTM/TPP 纳米粒在PBS 中的制备及粒径电势测定  56
    （二） CSTM/TPP 纳米粒在DI 水中的制备及粒径电势测定  56
    （三） CSTM/TPP-SPIO分子探针的制备及粒径电势测定  56
    （四） SPIO 包封率的测定  56-57
      1. 标准曲线的绘制  56-57
      2. SPIO 包封率的测定  57
  三、实验结果  57-62
    （一） CSTM/TPP NPs 在PBS 中粒径和电势的测定结果  57-58
    （二） CSTM/TPP NPs 在DI 水中粒径和电势的测定结果  58-59
    （三） CSTM/TPP-SPIO 分子探针粒径和电势的测定结果  59-60
    （四） SPIO 包封率的测定结果  60-62
      1. 标准曲线  60-61
      2. SPIO的包封率  61-62
  四、讨论和小结  62-63
第五部分 CSTM/TPP-SPIO 分子探针体内外实验  63-69
  一、材料与仪器  63-64
    （一） 药品和试剂  63
    （二） 仪器  63-64
  二、实验方法  64-65
    （一） CSTM/TPP-SPIO 分子探针细胞毒性试验  64
      1、HepG2 细胞的培养  64
      2. 细胞毒性实验  64
    （二） CSTM/TPP-SPIO 分子探针淋巴结病变定性诊断  64-65
      1、淋巴结转移模型  64-65
      2、MR 扫描  65
    （三） 肿瘤组织学分析  65
  三、实验结果  65-67
    （一）CSTM/TPP-SPIO 分子探针细胞毒性试验  65-66
    （二） CSTM/TPP-SPIO 分子探针淋巴结病变定性诊断结果  66-67
    （三） 切片的光镜观察  67
  四、讨论和小结  67-69
全文总结  69-71
参考文献  71-75
综述  75-83
致谢  83

相似论文

  1. 壳聚糖季铵盐金属配合物的热稳定性研究,O634
  2. 聚乙烯亚胺修饰糖脂共聚物介导基因治疗研究,R450
  3. 壳聚糖季铵盐复合纳滤膜的制备与性能表征,TB383.2
  4. CTA季铵化壳聚糖的合成及其应用性能研究,TU991.2
  5. 前列腺解剖带区的断层解剖学与MRI研究,R445.2
  6. 超声介导携自杀基因微泡对卵巢癌细胞抗瘤效应的实验研究,R737.31
  7. 新型高分子抗菌材料的合成及抑菌性研究,TB324
  8. 基于改性聚乙烯亚胺的基因药物传递体系研究,R341
  9. 去甲斑蝥素N-乳糖酰壳聚糖纳米粒的制备与性质研究,R94
  10. 抗体靶向的长循环阳离子脂质体介导DNA和siRNA转染的制剂学研究,R94
  11. 用于呼吸道基因输送的气雾剂研究,R94
  12. NLS和DMSO提高核糖体区打靶载体转染效率的研究,Q78
  13. 新型双亲性O-季铵盐-N，N-双烷基壳聚糖的合成及其性能研究,O636.1
  14. 羟基磷灰石-p53复合物转染鼻咽癌细胞的实验研究,R739.63
  15. 微血管通透性与脑胶质瘤分级之间定量关系的研究,R739.4
  16. 改性壳聚糖交联微球的合成及其蛋白吸附性能的研究,R318.08
  17. 改性蒙脱土细胞毒性、凋亡研究与改性磷酸钙转染载体研究,R114
  18. 新型壳聚糖衍生物的合成及壳聚糖季铵盐用于钛片表面修饰的研究,R94
  19. 用作肝靶向MRI造影剂的二倍体钆(Ⅲ)配合物的合成和性能研究,TQ421.7
  20. 壳聚糖季铵盐的制备及其应用性能研究,TQ28

中图分类: > 工业技术 > 化学工业 > 制药化学工业 > 中草药制剂的生产
© 2012 www.xueweilunwen.com