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土壤中明串珠菌的筛选和明串珠菌产细菌素的研究

作　者: 胡炎华
导　师: 高静；金红星
学　校: 河北工业大学
专　业: 生物化工
关键词: 明串珠菌 筛选 鉴定 细菌素 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳
分类号: TS201.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


明串珠菌是一类进行异型发酵的革兰氏阳性、耐氧的乳酸细菌。明串珠菌的生存环境较为宽泛,经常存在于自然生态环境中的绿色植物的地上部分和根部,但与需氧细菌和酵母相比数量相对较少。明串珠菌的筛选主要来源于植物及其发酵产品、乳制品和发酵肉制品,还未见有土壤中筛选明串珠菌的报道。本研究对青海省西宁市和河北省沽源县金莲山区林下土壤中的明串珠菌进行筛选,通过一系列生理生化实验鉴定,得到两株革兰氏阳性、过氧化氢酶阴性、不形成芽孢、异型发酵、椭球形成对或短链排列的明串珠菌。分别对其分类地位进行了初步定位,结果西宁菌株为肠膜明串珠菌肠膜亚种,沽源菌株为假肠膜明串珠菌。然后基于16S rDNA序列的系统发育树分析,准确定位了沽源菌株的分类地位。结果表明该明串珠菌属于假肠膜明串珠菌,菌株命名为kimshi005,其16S rDNA序列在GenBank中登录号为GU130195。明串珠菌可以产生许多功能性物质,细菌素即是其中之一。本研究用肠膜明串珠菌CGMCC1.10327发酵产生细菌素,该细菌素对大肠杆菌DH 5α、金黄色葡萄球菌ATCC 6538P和藤黄微球菌ATCC 10240A均具有明显的抑制作用。以大肠杆菌为指示菌确定了培养基组成、pH和接菌量对产细菌素影响。优化的培养基组成为每1L中含酵母浸粉3.0 g、柠檬酸铵3.0 g、MnSO4·4H2O 0.039 g、乙酸钠5.0 g、K2HPO4 2.0g、葡萄糖10.0 g以及吐温-80溶液1.6 mL。接菌量为1%,培养基初始pH6.2。非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后,定义了比移值Rf且比移值分别为0.272, 0.502, 0.630和0.917的四条条带具有对大肠杆菌的抑菌活性而其余条带没有,故产生了4种不同分子量的细菌素本研究意义在于从菌量很少的土壤中分离筛选明串珠菌并对其进行鉴定。研究所用的方法,可为以后进一步从土壤中或其他含菌量很少的条件下筛选出更多的明串珠菌打下基础。同时,由于产细菌素菌株为天津自制辣白菜中新筛肠膜明串珠菌,研究该菌株产细菌素的条件,可为以后进一步利用该菌株创造条件。

全文目录


摘要  4-5
ABSTRACT  5-9
第一章 绪论  9-18
  §1-1 明串珠菌概述  9-14
    1-1-1 明串珠菌的特征及分类  9-10
    1-1-2 明串珠菌的生境  10
    1-1-3 明串珠菌的筛选  10
    1-1-4 明串珠菌的鉴定  10-11
    1-1-5 明串珠菌的益生特性及其在功能性食品中的作用  11-12
    1-1-6 明串珠菌的生理代谢  12-14
  §1-2 细菌素概述  14-17
    1-2-1 细菌素的定义  14
    1-2-2 细菌素的分类  14-15
    1-2-3 细菌素与抗生素的区别  15
    1-2-4 细菌素的合成、检测及作用方式  15-16
    1-2-5 细菌素的研究现状  16
    1-2-6 明串珠菌产细菌素  16
    1-2-7 乳酸菌产细菌素的发酵条件研究  16-17
  §1-3 目的意义和研究内容  17-18
    1-3-1 目的意义  17
    1-3-2 研究内容  17-18
第二章 土壤中明串珠菌的筛选及鉴定  18-28
  §2-1 实验材料与方法  18-22
    2-1-1 材料与培养基  18-19
    2-1-2 主要试剂、仪器和生物软件  19
    2-1-3 实验方法  19-22
  §2-2 实验结果  22-25
    2-2-1 菌株的分离  22
    2-2-2 菌株的筛选  22
    2-2-3 菌种的鉴定  22-25
  §2-3 讨论  25-27
    2-3-1 明串珠菌的生存环境及初步筛选  25-26
    2-3-2 明串珠菌的分离与鉴定  26-27
  §2-4 小结  27-28
第三章 明串珠菌产细菌素的研究  28-46
  §3-1 实验材料与方法  28-33
    3-1-1 实验菌株与培养基  28
    3-1-2 主要仪器与试剂  28-29
    3-1-3 实验方法  29-33
  §3-2 实验结果  33-41
    3-2-1 明串珠菌对三种细菌的抑制作用  33-34
    3-2-2 高产细菌素明串珠菌的挑选  34
    3-2-3 明串珠菌产细菌素最佳发酵条件的优化  34-38
    3-2-4 细菌素的蛋白电泳  38-41
  §3-3 讨论  41-45
    3-3-1 明串珠菌对三种细菌的抑制作用  42
    3-3-2 最佳发酵时间的确定  42
    3-3-3 培养基成分对细菌素产量的影响  42-43
    3-3-4 其他因素的影响  43-44
    3-3-5 细菌素的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳  44-45
  §3-4 小结  45-46
第四章 结论  46-47
参考文献  47-52
附录A  52-53
致谢  53-54
攻读学位期间所取得的相关科研成果  54

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中图分类: > 工业技术 > 轻工业、手工业 > 食品工业 > 一般性问题 > 基础科学 > 食品微生物学
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