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原癌基因C-kit突变及表达在胃肠道间质瘤中的意义

作　者: 刘晓红
导　师: 马大烈；蔡在龙
学　校: 第二军医大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 胃肠道间质瘤原癌基因C-kit 基因突变免疫组织化学 PCR-SSCP 预后指标临床病理因素预后
分类号: R735
类　型: 硕士论文
年　份: 2002年
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内容摘要

目的：观察GIST中C-kit蛋白表达的特异性和敏感性，为GIST的临床诊断提供可靠标记物；探讨GIST中C-kit基因突变规律，为GIST恶性变判断，预后评估提供客观指标。方法：收集171例发生于消化道、网膜、肠系膜的间叶源性肿瘤，按照目前所公认的形态学标准进行初步分类筛选，通过以CD34为主的一组抗体将GIST、平滑肌肿瘤和神经源性肿瘤准确区分开；采用免疫组化行C-kit蛋白染色；运用PCR-SSCP、DNA测序的方法筛选C-kit基因突变病例；采用Fisher精确检验, χ2 检验和Kaplan-Meier等统计学方法回顾性分析C-kit癌基因突变与GIST临床病理特征、生物学行为、复发和死亡率的关系。结果：1、C-kit蛋白染色（122例）：GIST中C-kit蛋白阳性表达率为97％（118/122），阳性信号为胞浆、胞膜型，呈现棕黄色颗粒。C-kit蛋白在良性组、潜在恶性组以及恶性组的阳性表达率分别为98％（53/54），92%（12/13），96%（53/55），三组之间C-kit表达水平差异无显著性意义（χ2=1.167 P>0.05）。GIST不同部位（χ2=0.6409 P>0.05）、不同年龄组(χ2=0 P>0.05)、不同性别(χ2=0 P>0.05)及组织学分型(χ2=0 P>0.05)以及不同的免疫分型（χ2=1.0226 P>0.05）之间C-kit的表达率差异亦无显著性意义。平滑肌瘤和神经鞘瘤中C-kit蛋白染色均呈阴性反应。2、C-kit基因突变检测（82例）：所有检测病例PCR产物在琼脂糖凝胶电泳中均显示一条长度为157bp的泳动带，未见大片段的插入或缺失(含引物本身)。SSCP异常条带包括单链条带泳动变位、缺失或多带。1例单链条带泳动变位者经胶回收，序列分析证实有2处点突变,既Val（缬氨酸）567-Asp（天门冬氨酸）,Ile（异亮氨酸）570-Met（甲硫氨酸）。GIST中C-kit基因突变突变率是41.5%（34/82），其中，良性GIST未检测到C-kit基因异常，恶性GIST的突变率为54.8%（34/62）。平滑肌瘤和神经鞘瘤<WP=7>中未检测到C-kit基因突变。3、C-kit基因突变与预后的关系（82例）：C-kit基因突变阳性组患者的3年生存率为59%（20/34），C-kit基因突变阴性组患者的3年生存率为90%（43/48）,两组的差异有极显著性(χ2=11.6464, P<0.05)。COX多因素回归分析表明C-kit基因突变（χ2=8.871, P<0.05）、肿瘤最大径(χ2=5.693, P<0.05)、有丝分裂指数(χ2=4.958, P<0.05)、PCNA指数(χ2=7.244, P<0.05)、坏死(χ2=6.250, P<0.05)、浸润(χ2=5.595, P<0.05)、复发(χ2=17.200,P<0.05)、转移(χ2=11.283,P<0.05)有独立预后价值。C-kit基因突变阳性组和C-kit基因突变阴性组间肿瘤大小(χ2=16.7950, P<0.05)、PCNA指数(χ2=17.0990, P<0.05)、有丝分裂计数(χ2=11.2327, P<0.05)、坏死(χ2 =4.4036, P<0.05)、浸润(χ2=22.3912,P<0.05)、转移（χ2=12.9649, P<0.05）、复发(χ2 = 16.333, P<0.05)、死亡(χ2=11.6464, P>0.05)的统计学差异有明显意义，而C-kit基因突变阳性组和突变阴性组间年龄(χ2=0.0002, P>0.05)、性别(χ2=0.1413, P>0.05)、肿瘤的部位(χ2=7.5243，P>0.05)、细胞类型(χ2=0.872, P>0.05)、出血(χ2=0.6331, P>0.05)、囊性变（χ2=1.6079，P>0.05）及C-kit蛋白表达(χ2=0, P>0.05)无明显的统计学意义。结论:1、C-kit基因突变及蛋白表达分别从蛋白水平和分子水平证实GIST 是不同于消化道平滑瘤和神经鞘瘤的一种独立疾病，为GIST诊断和鉴别诊断提供重要的辅助手段。2、恶性GIST存在C-kit基因突变，良性未检测到突变，提示C-kit基因突变可作为GIST良恶性判断的重要参考指标。3、C-kit基因突变与GIST的大小、PCNA指数、有丝分裂计数、坏死、浸润、转移、复发及死亡密切相关，C-kit基因突变的检测可作为GIST 患者预后评估的有意义标志。4、C-kit基因改变对GIST的发生、发展可能起重要作用，但不是GIST发生的唯一分子机制。

全文目录

缩略语表  4-6
中文摘要  6-8
英文摘要  8-10
前言  10-14
第一部分 C-kit蛋白在胃肠道间质瘤中的表达及其临床意义  14-28
  材料与方法  15-18
  结果  18-23
  讨论  23-26
  参考文献  26-28
第二部分胃肠道间质瘤中原癌基因C-kit突变的检测  28-48
  材料与方法  29-37
  结果  37-41
  讨论  41-45
  参考文献  45-48
第三部分胃肠道间质瘤中原癌基因C-kit突变的预后价值  48-63
  材料与方法  49-52
  结果  52-58
  讨论  58-61
  参考文献  61-63
结论  63-64
附录  64-69
文献综述一  69-73
文献综述二  73-81
论文发表情况  81-82
致谢  82

原癌基因C-kit突变及表达在胃肠道间质瘤中的意义

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