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AT-毒素诱导烟草细胞死亡及对TMV抗性机制的研究

作　者: 白涛
导　师: 刘爱新
学　校: 山东农业大学
专　业: 植物病理学
关键词: 烟草赤星菌毒素细胞死亡诱导抗病性
分类号: S435.72
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

植物受非亲和病原物侵染可发生过敏性细胞死亡(hypersensitive cell death，HCD)，即过敏反应(hypersensitive response，HR)。HR被认为是植物应对外界刺激的一种主动反应，死亡细胞通过限定病原物的扩展而使植物获得局部抗性。毒素是许多亲和性植物病原菌致病过程中产生的次生代谢产物，离体使用可造成相应的寄主表现坏死斑反应，因此是病原菌的毒性因子，对决定病原菌的致病性有很重要作用。一直以来，毒素引起的植物细胞坏死被认为与HR有本质的区别，但对该死亡特征尚缺乏研究。本文以烟草赤星菌(Alternaria alternata)毒素(AT-toxin)为材料，对其诱发烟草细胞死亡的特征及诱导抗病毒病的机制等进行了初步的研究，目的是揭示毒素引起的坏死与HR有无相互联系。具体结果如下： 1．AT-毒素的初步纯化与分析为确定AT-毒素的组分，首先对毒素的蛋白质和非蛋白质组分的毒性进行了测定，结果表明：AT-毒素活性组分为非蛋白质；对毒素进行硅胶G薄层层析，初步分离得到10种组分，其中四种组分具有活性：组分Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ，初步说明了该毒素含有多种组分；进一步对该毒素进行液相色谱分析，也发现该毒素含多种组分，其中四种组分峰高和峰面积较大，含量较高；其致毒活性可能是由这些组分协同作用的结果，它们之间可能存在正协同或负协同作用关系。 2．AT-毒素对烟草叶片生理活性的影响该毒素在烟草上引起的最典型的症状是处理部位褪绿和组织细胞坏死。为明确该毒素是否影响烟草叶片的生理活性，从三个方面进行了分析：首先测定了毒素处理的烟草叶片中叶绿素的含量，结果发现，处理后24—48h，处理叶片的叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素及总叶绿素含量比对照均有所降低；同时测定了毒素对烟草叶片光合作用的影响，结果是，处理后24h，叶片光合能力下降，48h后逐渐恢复到正常状态。我们还测定了该毒素处理后叶片蛋白质含量的变化，结果表明，在毒素处理后，随着

全文目录

摘要  6-10
Abstract  10-14
引言  14-16
第一部分文献综述  16-34
  第一章植物病原毒素研究进展  16-24
  第二章植物过敏反应与细胞程序化死亡  24-28
  第三章植物诱导抗病性  28-34
第二部分研究内容  34-76
  第一章 AT-毒素的初步纯化与分析  34-48
    1.材料与方法  34-37
      1.1 材料  34
      1.2 方法  34-37
    2.结果与分析  37-45
      2.1 AT-毒素的生物活性测定  37
      2.2 培养条件对烟草赤星菌产毒的影响  37-41
      2.3 毒素蛋白质和非蛋白质组分毒性的测定  41
      2.4 AT-毒素的初步纯化  41-42
      2.5 AT-毒素的紫外光谱扫描分析  42
      2.6 AT-毒素的硅胶G的TL层析  42-44
      2.7 AT-毒素的液相色谱分析  44-45
    3.讨论  45-48
  第二章 AT-毒素对烟草生理活性的影响及诱发烟草细胞死亡的特征  48-64
    1.材料与方法  48-52
      1.1 材料  48
      1.2 方法  48-52
    2.结果与分析  52-60
      2.1 AT-毒素对烟草叶片叶绿素含量的影响  53
      2.2 AT-毒素对烟草叶片光合作用的影响  53-54
      2.3 AT-毒素对蛋白质含量的影响  54-56
      2.4 AT-毒素诱导活性氧积累的原位检测  56-57
      2.5 烟草愈伤组织的培养  57
      2.6 Evans blue染色法测定悬浮细胞死亡率  57
      2.7 DAPI染色观察细胞核的形态学特征  57-59
      2.8 DNA梯状条带的检测结果  59-60
    3.讨论  60-64
  第三章 AT-毒素诱导烟草对TMV的抗性及其机制  64-76
    1.材料与方法  64-69
      1.1 材料  64
      1.2 方法  64-69
    2.结果与分析  69-74
      2.1 AT-毒素诱导珊西烟对TMV的抗性  69-70
      2.2 TMV的提纯  70-71
      2.3 抗血清效价的测定  71
      2.4 AT-毒素诱导普通烟草对TMV抗性的ELISA检测  71-72
      2.5 Trypan blue染色检测微细胞死亡  72-74
    3.讨论  74-76
总结与展望  76-78
附表  78-80
硕士期间发表论文  80-82
参考文献  82-92
致谢  92-93

AT-毒素诱导烟草细胞死亡及对TMV抗性机制的研究

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