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小鼠骨髓红细胞微核流式细胞仪自动化检测方法的建立及其应用

作　者: 胡冰冰
导　师: 曹佳
学　校: 第三军医大学
专　业: 卫生毒理学
关键词: 吖啶橙微核实验红细胞微核率网织红细胞百分率流式细胞术环磷酰胺硝酸羟胺长春新碱 X射线辐射生物计量仪小鼠
分类号: R114
类　型: 硕士论文
年　份: 2005年
下　载: 261次
引　用: 2次
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内容摘要

微核实验是反映染色体损伤的重要实验方法,其在敏感性、特异性、准确性方面与经典的染色体畸变分析方法基本相当,却更加经济、简单、快速,因此,已被广泛应用于医学、生物学、环境等多领域的遗传毒性评估,并作为一种生物标志物监测暴露于有害职业和生活环境中的人群遗传损害。随着环境污染的日趋严重,关于微核实验自动化检测技术的研究成为毒理学领域中倍受关注的一个热点,而其中微核流式细胞术较为成熟。当前微核流式细胞术检测法有外周血CD71-FITC / PI联合染色法及以异染性荧光染料吖啶橙(AO)为染料的检测法,前者将感染疟原虫的红细胞作为仪器的内标以减小误差,但步骤繁琐、耗时较长,不利于早期诊断、及时治疗;后者则步骤简单、耗时较短,能够及时报告检测结果,为被检对象的早期诊断和治疗争得宝贵时间。但该方法技术难度大,重复性不好,本实验室针对这一缺陷,不断改进实验条件,将其应用于大鼠骨髓及人外周血的检测,并初步作为慢性迁延性外照射的生物计量仪使用,取得较理想的效果。在此基础上,本研究进一步对实验条件进行优化,建立了小鼠骨髓红细胞微核AO-FCM自动化检测方法,并将其应用于环磷酰胺(CP)、硝酸羟胺(HAN)、长春新碱(VCR)三种不同等级毒性化合物的检测及低剂量(0.1-6.0Gy)急性辐射的剂量估算。同时,本研究将快速AO人工显微镜法加以改进,取得较理想的效果。本研究所得主要结果如下:1.经CP处理后,fMNPCE与处理剂量间呈现良好的剂量-反应关系,且快速AO人工显微镜法检测结果与标准Giemsa法检测结果具有良好的相关性(r = 0.978,P < 0.01);AO-FCM检测结果同标准Giemsa法也具良好相关性(r = 0.973,P < 0.01)。AO-FCM法检测的fMNNCE随着剂量增加呈上升趋势;%Ret随剂量增加而降低,AO人工显微镜法与AO-FCM法检测结果具良好相关性(r = 0.808,P < 0.01)。2.经HAN处理后,小鼠骨髓fMNPCE呈上升趋势,但与对照组比较无显著性差异,快速AO人工显微镜法与AO-FCM法检测的结果之间具良好的相关性(r = 0.993,P < 0.01);%Ret随剂量增加呈上升趋势,但与对照组无显著性差异,两种方法检测的结果之间具有

全文目录

英文缩略词表  4-6
英文摘要  6-8
中文摘要  8-10
论文正文小鼠骨髓红细胞微核流式细胞仪自动化检测方法的建立及其应用  10-72
  前言  10-12
  第一部分快速AO 人工显微镜法的改进及AO-FCM 微核自动化检测方法的建立  12-25
    材料和方法  12-16
    实验结果  16-22
    讨论  22-24
    小结  24-25
  第二部分 AO-FCM 微核自动化检测方法的应用  25-59
    材料和方法  25-26
    实验结果  26-49
    讨论  49-58
    小结  58-59
  全文结论  59-61
  照片  61-65
  致谢  65-66
  参考文献  66-72
文献综述细胞分子遗传学方法应用于辐射生物剂量计的研究  72-78
  参考文献  76-78
研究生阶段撰写的文章  78

小鼠骨髓红细胞微核流式细胞仪自动化检测方法的建立及其应用

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