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天山雪莲抗寒相关基因的克隆及功能的初步分析

作　者: 刘海亮
导　师: 祝建波
学　校: 石河子大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 天山雪莲硬脂酰ACPΔ~9脱饱和酶基因脱水素转基因烟草抗寒性
分类号: Q943.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
下　载: 318次
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内容摘要

天山雪莲(Saussurea involucrata Kar.et Kir)为新疆珍稀物种,生境特异,自然生长环境极为严酷,具有很强的抗寒能力。利用天山雪莲试管苗构建了叶片全长cDNA文库,克隆了硬脂酰ACPΔ9脱饱和酶基因(sikSACPD)和与抗寒,抗旱相关基因(sikDh),并通过转基因烟草。对它们的表达特点及功能进行分析鉴定。1.利用SMART技术构建天山雪莲全长cDNA文库从低温诱导的天山雪莲叶片中分离总RNA,利用CreatorTM SMARTTM cDNA Library Construction技术构建了天山雪莲全长cDNA文库,原始文库滴度达3.23×105cfu/ml文库插入片段多在1000bp左右。随机挑取10个克隆进行测序,通过生物信息学初步分析:100%为全长cDNA,大部分可以在GenBank中找到同源序列。2.利用RT-PCR及PCR方法克隆了硬脂酰ACPΔ9脱饱和酶基因运用PCR筛库技术克隆了硬脂酰ACPΔ9脱饱和酶基因,得到sikSACPD全长cDNA序列(1555bp)。3.生物信息学分析得到一与抗寒,抗旱相关基因(sikDh)随机挑取文库克隆测序,生物信息学分析,获得一可能与抗寒、抗旱相关的基因(sikDh),全长cDNA序列(659bp),CDS:345bp。从基因组DNA中克隆DsikDh基因,测序结果显示,该基因不含有内含子。4.在大肠杆菌BL21中表达sikSACPD、sikDh基因将sikSACPD、sikDh基因分别构建原核表达载体,在细菌中表达出蛋白,对sikSACPD、sikDh表达出的蛋白,纯化后免疫新西兰白兔,制备抗血清。5.在转基因烟草中研究sikSACPD基因的功能将天山雪莲的sikSACPD基因的编码区cDNA序列分别置于花椰菜花叶病毒35S启

全文目录

摘要  5-7
Abstract  7-11
主要符号缩略表  11-12
第一章文献综述  12-28
  第一节植物抗寒基因工程进展  12-24
    1. 低温胁迫对植物的伤害  12
    2. 植物的抗寒分子机理  12-14
    3. 植物在低温胁迫诱导下表达的基因和功能性蛋白  14-17
    4. 植物对低温胁迫应答的信号转导途径（signal Transduction pathway）  17-20
    5. 植物抗寒基因工程的研究  20-24
  第二节植物的不饱和脂肪酸脱氢酶研究进展  24-27
    1. 脂肪酸脱氢酶的种类  24
    2. 脂肪酸脱氢酶的生物学特性及机制  24-25
    3. 脂酰ACP脱饱和酶  25-27
  第三节立题意义和技术路线  27-28
第二章实验材料和方法  28-45
  1 实验材料  28-31
  2、基本实验方法  31-45
第三章研究工作  45-102
  第一节天山雪莲全长cDNA文库的构建及生物信息学分析  45-50
    摘要  45
    1 材料和方法  45-46
    2 结果与分析  46-49
    3 讨论  49-50
  第二节天山雪莲（Saussurea involucrata Kar.et Kir）SikSACPD基因的克隆和功能分析  50-83
    摘要  50-51
    1 材料和方法  51-64
    2 结果与分析  64-81
    3 讨论  81-83
  第三节天山雪莲SikDh基因的生物信息学、表达特征及功能分析  83-100
    摘要  83
    1 材料与方法  83-91
    2 结果与分析  91-99
    3 讨论  99-100
  第四节结论  100-102
参考文献  102-110
致谢  110-111
作者简介及发表论文情况  111-112
导师评语  112

天山雪莲抗寒相关基因的克隆及功能的初步分析

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