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一个水稻DEAD-box RNA解旋酶基因OsBIRH1的克隆鉴定

作　者: 宋莉芸
导　师: 宋凤鸣
学　校: 浙江大学
专　业: 植物病理学
关键词: 水稻(Oryza sativa L.) 拟南芥(Arabidopsis thalian )DEAD-box RNA解旋酶抗病性
分类号: S511
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
下　载: 43次
引　用: 1次
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内容摘要

DEAD-box RNA解旋酶在RNA的新陈代谢过程中起着重要作用,从RNA的合成到RNA的降解都需要它的存在,同时它对植物的生长发育和抗逆反应中起调控作用。克隆鉴定了一个水稻DEAD盒RNA解旋酶基因OsBIRH1。OsBIRH1基因全长cDNA为2167bp,包含一个1926bp的开放阅读框,编码一个641个氨基酸组成的蛋白,预测分子量为70.8kD。OsBIRH1基因位于水稻第3号染色体上,由8个外显子和7个内含子组成。预测的OsBIRH1蛋白包含DEAD盒解旋酶所特有的保守DEAD和HELICc结构域以及保守模体结构。系统进化树分析表明,OsBIRH1与拟南芥和人DEAD盒解旋酶有很高的同源性,氨基酸序列的一致性达到47%～54%。为了研究水稻OsBIRH1蛋白的生化特性,我们将OsBIRH1的编码序列克隆到原核表达载体pRSET-A中,并纯化了重组OsBIRH1蛋白。携带有pRSETa-OsBIRH1质粒的细菌经IPTG诱导,用Ni-NTA His Bind树脂从包含体中纯化获得重组的OsBIRH1蛋白。SDS-PAGE电泳分析表明,重组OsBIRH1蛋白大小约为～75kDa,与其预测的分子量基本一致。为了研究水稻OsBIRH1在抗病反应中的可能作用,我们构建了OsBIRH1的转基因双元载体,并用浸花法转化拟南芥。目前已经获得转基因种子,筛选和转基因植株的鉴定正在进行中。

全文目录

致谢  4-7
摘要  7-8
Abstract  8-9
1 文献综述和研究背景  9-15
  1.1 植物的抗病性  9-10
    1.1.1 抗病基因(R)与病原菌无毒基因(Avr)互作产生的抗病性  9-10
    1.1.2 植物的诱导抗病性  10
  1.2 DEAD-box RNA解旋酶在生物体中的作用  10-15
    1.2.1 DEAD-box RNA解旋酶的结构-功能关系  10-11
    1.2.2 DEAD-box蛋白家族成员的细胞功能  11-13
    1.2.3 DEAD-box RNA解旋酶在植物中作用的研究进展  13-15
  1.3 本研究的目的意义和研究内容  15
2 材料与方法  15-20
  2.1 试菌株载体，拟南芥，培养基  15-16
  2.2 水稻DEAD-box RNA解旋酶基因OsBIRH1 cDNA的克隆  16-17
  2.3 DNA的序列测定和分析  17
  2.4 OsBIRH1融合蛋白的原核表达  17-19
    2.4.1 原核表达载体pRSET-A-OsBIRH1的构建  17-18
    2.4.2 OsBIRH1融合蛋白的诱导表达及制备  18
    2.4.3 OsBIRH1蛋白的纯化  18-19
  2.5 水稻OsBIRH1基因植物转化双元表达载体的构建  19
  2.6 拟南芥转化以及转基因植株的筛选  19-20
3 结果与分析  20-22
  3.1 OsBIRH1基因全长cDNA序列的克隆及序列分析  20
  3.2 OsBIRH1蛋白的结构与系统进化树分析  20-21
  3.3 OsBIRH1蛋白原核表达载体的构建和蛋白纯化  21
  3.4 OsBIRH1基因植物转化双元表达载体的构建  21
  3.5 OsBIRH1基因转化拟南芥植株的获得  21-22
4 讨论与后续工作  22-31
参考文献  31-40

一个水稻DEAD-box RNA解旋酶基因OsBIRH1的克隆鉴定

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