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Cdk5在NGF撤退和STS诱导的PC12细胞凋亡中的作用

作　者: 吴少波
导　师: 武栋成
学　校: 武汉大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: cdk5 p53 p35 凋亡星形孢菌素 NGF撤退
分类号: R741
类　型: 硕士论文
年　份: 2005年
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内容摘要

凋亡是神经系统发育中的正常生理现象。但在成年脑中,神经细胞的凋亡又成为某些急性和非急性神经退行性疾病如脑缺血、脑外伤、帕金森病和阿尔茨海默病等潜在的致病因素。已有研究表明,细胞周期素依赖性蛋白激酶-5（Cyclin-dependent kinase-5,Cdk5）的异常表达和活性失调与神经细胞的凋亡有关,但其作用机制仍未完全阐明。本文以神经细胞样分化的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞系PC12细胞作为模型,以神经生长因子（nerve growth factor,NGF）撤退和星形孢菌素（Staurosporine,STS）诱导细胞凋亡,探讨Cdk5、p35及p53在PC12细胞凋亡中可能的作用机制。主要内容如下: 1.建立NGF撤退诱导的分化的PC12细胞凋亡模型,分析Cdk5/p35和p53的表达水平在此凋亡途径中的变化,探讨其可能的作用机制。实验结果:MTT比色法可见,NGF撤退48h对PC12细胞MTT代谢有明显抑制作用,与对照组比较,差异有高度显著性（P<0.01）。Roscovitine和JNK抑制剂SP600125对NGF撤退造成的PC12细胞损伤均有保护作用（P<0.05）;突变型p53^R175H质粒的转染PC12对细胞有显著保护作用（P<0.01）。琼脂糖凝胶电泳显示NGF撤退36h后有DNA凋亡梯带的产生。透射电镜观察可见,NGF撤退16h细胞出现染色质聚集,核膜缺损;36h后可见明显的凋亡形态学特征。流式细胞术检测显示NGF撤退24h后细胞凋亡率上升;SP600125和roscovitine使凋亡率显著下降;突变型p53^R175H的转染使凋亡率显著下降。Hoechst 33258染色可见,NGF撤退24h后细胞核呈典型的凋亡形态学特征:roscovitine预处理后核固缩细胞数目显著减少;SP600125的预处理使细胞受NGF撤退损伤程度减轻,核固缩细胞数目减少;转染突变型p53^R175H后,核固缩细胞数目显著减少,大多数细胞核形态正常。 Western blotting结果表明NGF撤退引起了Cdk5、p35、p53和p21蛋白表达的增加,且Cdk5表达增加早于p53蛋白。Roscovitine对Cdk5的表达水平无明显影响;SP600125使p53的表达水平有所降低,但对Cdk5的表达水平无明显影响;细胞转染突变型p53^R175H质粒后,p53的表达有显著增高,但Cdk5、p35的表达水平无明显变化。 2.建立STS诱导的分化的PC12细胞凋亡模型,分析Cdk5/p35和p53的

全文目录

一、中文摘要  4-6
二、英文摘要  6-11
三、引言  11-13
四、正文  13-48
  材料与方法  13-20
  结果  20-36
  讨论  36-41
  小结  41-42
  参考文献  42-48
五、综述  48-56
六、致谢  56

Cdk5在NGF撤退和STS诱导的PC12细胞凋亡中的作用

内容摘要

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