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雷公藤内酯醇与传统抗肿瘤药联合抗人肝癌SMMC-7721细胞活性研究及机理探讨
作 者: 吴世成
导 师: 丁虹;石米扬
学 校: 武汉大学
专 业: 微生物与生化药学
关键词: 雷公藤内酯醇 人肝癌SMMC-7721 细胞培养 DNA ladder SD大鼠 caspase-3
分类号: R735.7
类 型: 硕士论文
年 份: 2004年
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内容摘要
雷公藤内酯醇与传统抗肿瘤药物阿霉素和羟基喜树碱联合作用对体外培养人肝癌SMMC-7721细胞,主要检测指标是细胞形态观察,台盼蓝染色,MTT染色,DNA ladder等,检测药物对肿瘤细胞的杀伤作用。 SD大鼠经济、易饲养、易获得,且模型成功率高,自然消退率低,是建立移植性肝癌模型的理想选择。将人肝癌SMMC-7721细胞皮下种植在SD大鼠上,静脉注射雷公藤内酯醇,游标卡尺测量肿瘤体积大小,软件分析数值可靠性。 Caspase家族属于天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶,围绕活性中心位点半胱氨酸的氨基酸残基是保守的。正常情况下,胞质中的Caspase-3以无活性的酶原形式存在,只有当细胞凋亡时,才被激活为有活性的Caspase-3。测定肿瘤细胞培养时药物联合作用细胞时caspase-3表达情况,以探讨药物联合作用的分子生物学机理。 与对照组相比,体外培养肿瘤细胞在用甲素处理后活细胞大幅减少,而甲素与阿霉素或羟基喜树碱联合作用比单独用一种药物的杀细胞效果要强得多。体内接种肿瘤细胞在用药后,肿瘤块体积较小且增长缓慢,而对照组肿瘤体积却大幅增长;雷公藤内酯醇与阿霉素或羟基喜树碱联合用药作用体外培养肿瘤细胞后,caspase-3表达明显上调。 得出结论:雷公藤内酯醇对体外和体内培养的人肝癌SMMC-7721细胞有明显的促凋亡作用。它与传统抗肿瘤药联合作用该细胞时呈现强烈的协同作用;其对肿瘤细胞的杀伤作用与caspase-3的激活有关。
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全文目录
第一部分 雷公藤内酯醇单独或与传统抗肿瘤药联合抗体外人肝癌SMMC-7721细胞活性 9-31 前言 9-16 1 雷公藤简介 9-10 2 抗肿瘤化疗药物 10-14 2.1 化疗概念 10 2.2 化疗药物的种类 10-11 2.3 雷公藤内酯醇的抗肿瘤作用 11-13 2.4 雷公藤诱导细胞凋亡的研究进展 13-14 3 本论文的研究背景及目标 14-16 材料与方法 16-21 1 实验材料及仪器 16-18 1.1 实验仪器 16 1.2 药品和细胞 16-18 1.2.1 药品 16-18 1.2.2 细胞培养 18 2 细胞毒性实验 18-21 2.1 台盼蓝染色 18-19 2.2 DNA ladder检测 19-20 2.3 MTT试验 20-21 结果 21-26 1 雷公藤内酯醇作用人肝癌SMMC-7721细胞后显微摄像图(10×10) 21-22 2 药物作用细胞后台盼蓝染色计数结果 22-24 3 肿瘤细胞DNA电泳图 24-25 4 肿瘤细胞增殖抑制实验——MTT检测 25-26 讨论 26-28 参考文献 28-31 第二部分 雷公藤内酯醇对接种人肝癌SMMC-7721细胞的SD大鼠抗肿瘤活性研究 31-37 前言 31-33 材料与方法 33-34 1 药品与仪器 33 1.1 实验仪器 33 1.2 药品和细胞 33 1.3 动物分组 33 2 皮下种植肿瘤细胞 33 3 统计分析 33-34 结果 34-35 讨论 35-36 参考文献 36-37 第三部分 雷公藤内酯醇与传统抗癌药联合抗肿瘤内部机理研究 37-58 前言 37-46 1 细胞凋亡 37 2 caspase-3简介 37-46 2.1 caspase-3的分子生物学特点 37-39 2.2 Caspase-3的活化 39 2.3 Caspase-3在肝细胞癌中的表达 39-40 2.4 Caspase-3在肝癌细胞发生过程中的调节机制 40-46 2.4.1 Caspase-3的活化与肝细胞癌的关系 40 2.4.2 HBx与Caspase-3的关系 40-41 2.4.3 Caspase-3与p53的关系 41-42 2.4.4 caspase-3与细胞凋亡 42-46 2.4.4.1 caspase-3处于细胞凋亡的下游 42-43 2.4.4.2 caspase-3的底物 43-44 2.4.4.3 caspase-3抑制剂 44-45 2.4.4.4 caspase-3与Bcl-2家族相互作用 45-46 材料与方法 46-50 1 药品与仪器 46-47 1.1 实验仪器 46 1.2 药品和细胞 46-47 1.2.1 药品配制 46-47 1.2.2 细胞培养 47 2 实验方法 47-48 2.1 提取肿瘤细胞蛋白质,进行SDS-PAGE电泳 47-48 2.2 Western印迹法 48 3 实验步骤 48-50 3.1 SDS-PAGE步骤 48 3.1.1 从细胞中分离提取蛋白质 48 3.1.2 组装电泳系统 48 3.1.3 SDS-PAGE 48 3.2 Western印迹步骤 48-50 3.2.4 蛋白质转移至固相支持物硝酸纤维素膜(NC膜) 49 3.2.5 封闭硝酸纤维素膜的免疫球蛋白结合位点 49 3.2.6 一抗(鼠抗人)与靶蛋白结合 49 3.2.7 结合辣根过氧化物酶的二抗(羊抗鼠)与一抗结合 49 3.2.8 使用酶联抗体生色底物(含双氧水和四氯萘酚) 49-50 结果 50-51 1 用药后肿瘤细胞中蛋白质SDS-PAGE电泳图 50 2 Western blot 50-51 讨论 51-52 参考文献 52-58 硕士研究生期间期间发表和待发表的文章 58-59 致谢 59
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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肝肿瘤
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