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暗纹东方鲀（Takifugu fasciatus）线粒体DNA的分离纯化及其几个重要基因的克隆与序列分析

作　者: 邵爱华
导　师: 朱江
学　校: 苏州大学
专　业: 细胞生物学
关键词: 线粒体DNA(mtDNA) 暗纹东方鲀(Takifugu fasciatus) 分离纯化克隆分子系统学分析
分类号: S917.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2005年
下　载: 284次
引　用: 1次
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内容摘要

线粒体DNA(mtDNA)是分子生物学研究的一个热门领域,已成为鱼类进化生物学和群体遗传学研究的重要遗传标志,mtDNA 分析技术在国外已被遗传学家用于鱼类种群遗传结构及品系鉴定的研究。暗纹东方鲀(Takifugu fasciatus)是具有极高经济价值的特种水产养殖对象,有关暗纹东方鲀mtDNA 的研究迄今未见报道。本论文在改进鱼类mtDNA 分离纯化方法的基础上,利用JGB(Janus Green B)能特异地对线粒体进行超活染色的特性来跟踪线粒体的提取,研究离心速度与线粒体回收率的关系。同时对常用的方法和技术进行了探索和改进,利用暗纹东方鲀组织较少取样,获取纯度好、得率高的mtDNA。利用分离纯化的暗纹东方鲀肝脏mtDNA 为模板,按照红鳍东方鲀(Takifugu rubripes ) mtDNA 序列设计合成特异引物进行PCR 扩增,首次克隆并测定了暗纹东方鲀mtDNA 的Cytb、COI 、COII、COIII、D-loop 基因及其侧翼的tRNA 基因。上述基因已在GenBank 登录。运用DNA 分析软件,对暗纹东方鲀mtDNA 测定的基因进行序列和结构分析,并选取GenBank 中十多个目近20 种鱼类的相应序列进行比较分析,结果显示暗纹东方鲀与这些鱼类具有较高的核苷酸和氨基酸同源性。利用分子生物学相关软件,对暗纹东方鲀与其他种类鱼的相关基因序列建立进化树,并与传统的分类地位进行比较,结果表明与传统的分类地位基本吻合。我们认为,对于鱼类,在采用线粒体基因序列进行分子进化分析时,应该综合考虑其繁殖模式及生态特点,将分子与形态、生态行为等多方面的证据结合起来,对生物多样性作出更客观的描述和解释。暗纹东方鲀线粒体的几个编码基因可能成为东方鲀属不同种间聚类分析与分子系统进化学研究的合适基因。推定的8 个tRNA 的二级结构表明:它们都具有典型的三叶草型结构,各臂的碱基配对率大多较高,稳定性较好。

全文目录

中文摘要  3-4
英文摘要  4-6
引言  6-8
第一部分文献综述  8-26
  第一章动物线粒体基因组的结构及其功能  8-12
  第二章鱼类mtDNA 全序列组成特征及研究进展  12-16
  第三章鱼类mtDNA 多态研究和应用进展  16-26
第二部分暗纹东方鲀mtDNA 的提取与纯化  26-35
  第一章材料和方法  26-30
  第二章暗纹东方鲀mtDNA 的提取与纯化  30-35
第三部分暗纹东方鲀mtDNA几个重要基因的克隆和序列分析  35-79
  第一章材料和方法  36-40
  第二章细胞色素b 及其侧翼tRNA 基因的克隆与序列分析  40-48
  第三章细胞色素氧化酶 Ⅱ 亚基及两侧tRNA 基因的克隆  48-55
  第四章细胞色素氧化酶 Ⅲ 亚基序列及其分子进化分析  55-63
  第五章细胞色素氧化酶 Ⅰ 亚基及其侧翼tRNA 基因的克隆  63-72
  第六章 mtDNA 控制区序列基因结构分析  72-79
结论  79-80
在学期间发表的论文  80-81
致谢  81-82
详细摘要  82-84

暗纹东方鲀（Takifugu fasciatus）线粒体DNA的分离纯化及其几个重要基因的克隆与序列分析

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