|
目的:翼状胬肉是一种常见的、多发的眼表疾病,复发率较高。绞股蓝皂甙(gypenosides,Gyp)为葫芦科植物绞股蓝的主要药效成分。国内外多年的药理研究表明,Gyp具有抗肿瘤,降血脂、血糖,抗氧化,抗肝、肾纤维化等作用。这些作用使其具备了辅助治疗和预防翼状胬肉的潜力。但确切机制尚未明了,本研究旨在初步探讨绞股蓝皂甙对人翼状胬肉成纤维细胞(human pterygium fibroblasts,HPF)增殖的影响。方法:取术中切下的人翼状胬肉组织标本,体外贴壁细胞培养,传至第3-6代时,以抗波形蛋白抗体进行免疫组化染色,结合细胞形态学特征鉴定为成纤维细胞;分别用25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml浓度的Gyp干预HPF,同时设不加药的阴性对照组及只加培养液的空白对照组,24,48,72,96小时后,MTT法检测细胞增生抑制率,并绘出时间、剂量效应曲线;用6孔板做细胞爬片后,分别用0μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml浓度的Gyp作用24小时,免疫组化法检测HPF的增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果:(1)体外培养的HPF免疫组化染色后,波形蛋白表达阳性,结合细胞形态学特征,可以鉴定为成纤维细胞。(2)MTT实验结果显示,Gyp浓度≥25μg/ml时,能显著抑制HPF增生(p<0.05)。随着Gyp干预浓度的增大和干预时间的延长,即在25-400μg/ml浓度下,作用24-72小时,抑制强度可呈剂量和时间依赖性加强(p<0.05)。干预时间超过72小时以后,抑制率未见显著增加,呈饱和状态。(3)当Gyp在25-400μg/ml的浓度范围内,可呈浓度依赖性地抑制HPF表达PCNA(p<0.05)。结论:Gyp可显著抑制体外培养的HPF的增殖,在一定浓度和时间范围内,作用呈剂量和时间依赖性。
|