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合欢皮不同提取组分抗肿瘤新生血管作用的研究

作　者: 刘玲艳
导　师: 邱丽颖
学　校: 江南大学
专　业: 微生物与生化药学
关键词: 合欢皮提取工艺内皮细胞毒性药效
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

肿瘤血管形成为肿瘤生长和转移提供营养和途径,因此,抑制肿瘤血管形成是治疗肿瘤的一种重要方法。目前,国内外已有针对肿瘤血管的药物上市(阿瓦斯汀、恩度),但此类药物价格昂贵,只能注射给药,所以开发低用量可口服的抗肿瘤血管形成药物是肿瘤治疗药物研究的目标之一内皮细胞是参与血管形成的细胞中最为重要的细胞,抑制内皮细胞的生长就能阻止血管的形成进而对肿瘤起到抑制作用。本文采用人微血管内皮细胞(HMEC-1)为药物筛选模型,对中药合欢皮的多种提取组分进行筛选,进一步通过活性组分的干物质得率、工艺路线简易程度、对内皮细胞的毒性为评价指标,寻找高效低毒的活性组分,并对有效组分的体内毒理学、体外药效学和体内药效学进行初步探讨。论文确定了三种有效组分的提取路线,分别为原料冻干粉水溶液,依次用石油醚、水饱和正丁醇萃取,所得的正丁醇相(组分19)；水提醇沉后醇溶部分冻干粉水溶液用水饱和正丁醇萃取,所得的正丁醇相(组分21)；乙醇回流后的冻干粉水溶液经水饱和正丁醇萃取,所得正丁醇相(组分23)。这三种路线工艺简单、干物质得率高、活性好、毒性小。这三种提取物的体外药效学研究发现,具有显著抑制血管内皮细胞增殖的活性。并且这三种提取物具有明显的抑制血管内皮细胞迁移的活性。组分23对血管生成也具有显著的抑制作用。这三种提取物的毒理学研究发现,毒性表现主要有：延长血液凝固时间；降低小鼠自主活动频率；对心、肝、肾、肺、脾组织有明显损伤；提高心肝脑肺肾组织的MDA含量,降低SOD活力；不同程度升高血清BUN、GOT和GPT的浓度。通过三个有效组分毒性的进一步比较,组分23毒性最小,为最理想组分,所以进一步探讨其体内药效。组分23的体内药效学研究表明,与模型对照组相比,给予组分23后可以改善荷瘤小鼠生活质量；能够抑制肿瘤的生长,镜下病理显示肿瘤细胞出现核固缩、片状坏死及周边炎症细胞浸润等；并呈现一定的剂量相关性。本文建立以合欢皮药材提取率、提取物生物活性、毒性为评价指标的提取工艺,提取物为抑制血管内皮细胞增殖的组分,为申报以合欢皮抗新生血管生成的有效部位的中药五类新药创造了条件。

全文目录

摘要  3-4
Abstract  4-6
目录  6-9
第一章绪论  9-16
  1.1 肿瘤的血管治疗概述  9-12
    1.1.1 肿瘤与治疗现状  9
    1.1.2 血管生成  9-11
    1.1.3 血管生成与肿瘤  11-12
  1.2 抑制肿瘤血管药物现状  12-13
  1.3 中药抗肿瘤新生血管现状  13
  1.4 合欢皮概述  13-14
    1.4.1 合欢皮的作用  13-14
    1.4.2 合欢皮抑制新生血管生成前期实验结果  14
  1.5 本文采用细胞概述  14
  1.6 课题主要研究内容  14-16
第二章合欢皮中抗人微血管内皮细胞有效组分的提取  16-24
  2.1 引言  16
  2.2 材料与试剂  16-18
    2.2.1 实验材料  16
    2.2.2 实验仪器  16-17
    2.2.3 主要试剂  17-18
  2.3 实验方法  18-20
    2.3.1 HMEC-1细胞生长曲线的测定  18
    2.3.2 SRB法细胞增殖抑制试验  18
    2.3.3 抗人微血管活性组分的提取分离  18-19
    2.3.4 得率  19
    2.3.5 细胞毒评价  19
    2.3.6 组分化学定性  19-20
    2.3.7 组分定量  20
    2.3.8 正丁醇残留检测  20
    2.3.9 统计学处理  20
  2.4 结果与讨论  20-23
    2.4.1 HMEC-1细胞生长曲线  20-21
    2.4.2 各组分细胞活性检测结果  21
    2.4.3 活性组分得率,半数抑制率以及细胞毒评价结果  21-22
    2.4.4 得率  22
    2.4.5 定性结果  22-23
    2.4.6 定量、正丁醇残留结果  23
  2.5 本章小结  23-24
第三章合欢皮有效组分体外药效学初步评价  24-32
  3.1 引言  24
  3.2 材料与仪器  24-25
    3.2.1 材料  24
    3.2.2 主要试剂  24-25
    3.2.3 主要仪器  25
  3.3 实验方法  25-26
    3.3.1 3B11细胞生长曲线的测定  25
    3.3.2 SRB法在3B11细胞上测定IC_(50)值  25
    3.3.3 细胞迁移实验  25-26
    3.3.4 成管实验  26
    3.3.5 HE染色观测细胞形态变化  26
    3.3.6 统计学处理  26
  3.4 结果与讨论  26-31
    3.4.1 3B11细胞的生长曲线  26-27
    3.4.2 三个有效组分对3B11细胞的IC_(50)  27
    3.4.3 三个有效组分对HMEC-1细胞的迁移能力的影响  27-29
    3.4.4 三个有效组分对3B11细胞的迁移能力的影响  29-30
    3.4.5 成管实验结果  30-31
    3.4.6 组分23对细胞形态的影响  31
  3.5 本章小结  31-32
第四章合欢皮三个有效组分体内毒理学评价  32-45
  4.1 引言  32
  4.2 材料与试剂  32-33
    4.2.1 实验材料  32
    4.2.2 实验仪器  32-33
    4.2.3 主要试剂  33
  4.3 实验方法  33-36
    4.3.1 给药剂量的确定  33-34
    4.3.2 给药剂量与小鼠分组  34
    4.3.3 一般观察指标  34
    4.3.4 生化指标的测定  34-35
    4.3.5 HE染色  35-36
    4.3.6 统计学处理  36
  4.4 结果与分析  36-44
    4.4.1 剂量的确定和小鼠的分组  36-37
    4.4.2 一般毒性表现  37-40
    4.4.3 生化指标的结果  40-42
    4.4.4 组织病理学图片  42-44
  4.5 本章小结  44-45
第五章合欢皮有效组分体内药效学评价  45-55
  5.1 引言  45
  5.2 材料与试剂  45-47
    5.2.1 实验材料  45
    5.2.2 实验仪器  45-46
    5.2.3 主要试剂  46-47
  5.3 实验方法  47-48
    5.3.1 肿瘤小鼠模型的建立及分组  47
    5.3.2 一般指标观察  47
    5.3.3 器官指数等指标的测定  47
    5.3.4 免疫组化染色  47-48
    5.3.5 细胞凋亡检测  48
    5.3.6 统计学处理  48
  5.4 结果与讨论  48-53
    5.4.1 对H22荷瘤小鼠食量的影响  48-49
    5.4.2 对H22荷瘤小鼠饮水量的影响  49
    5.4.3 组分23对H22荷瘤小鼠体重的影响  49-50
    5.4.4 组分23对H22荷瘤小鼠自主活动的影响  50-51
    5.4.5 组分23对H22荷瘤小鼠血压和凝血时间的影响  51
    5.4.6 组分23对H22荷瘤小鼠肿瘤的影响  51-53
  5.5 本章小结  53-55
第六章结论与展望  55-56
致谢  56-57
参考文献  57-61
已发表文章  61

合欢皮不同提取组分抗肿瘤新生血管作用的研究

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