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酸浆属植物中免疫抑制活性物质的筛选及药理学研究

作　者: 于有军
导　师: 刘建文
学　校: 华东理工大学
专　业: 微生物与生化药学
关键词: 酸浆提取物免疫抑制 T细胞 Thl/Th2平衡 HO-1
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

自身免疫性疾病已经成为严重影响人类健康的第三大疾病,积极寻找和开发低毒高效的免疫抑制药物,是世界医药学界的一项重大课题。国内外学者经过大量研究,发现酸浆属植物具有抗癌、抑菌、抗炎和降血糖等多种药效,但对酸浆属植物的免疫抑制作用尚无系统的研究。本课题通过原代培养BALB/c小鼠的脾细胞,建立T淋巴细胞体外异常增殖模型,通过体外免疫抑制活性筛选,筛选出具有T淋巴细胞抑制作用的酸浆属植物单体化合物。本研究运用MTT法,评价单体的细胞毒性；采用[3H]TdR掺入法,研究单体的免疫抑制活性；利用流式细胞术,观察单体对细胞周期和细胞亚型的影响；通过ELISA法,测定单体对Th1/Th2细胞因子平衡的调节；采用Western Blotting及RT-PCR方法,考察单体对血红素加氧酶-1表达的影响;采用二甲苯诱导的耳廓肿胀体内模型,验证单体的体内药效。研究表明,筛选出的低毒高效单体Physalin H,对T淋巴细胞增殖抑制作用呈浓度和时间依赖性。Physalin H对ConA激活的小鼠T淋巴细胞的EC50为0.69μg/mL,最佳药物作用时间为48h。流式细胞技术结果显示,Physalin H阻遏细胞从G1期到S期的转换,抑制T淋巴细胞分裂,同时提高抑制性T细胞(CD8+)相对数量,从而抑制T淋巴细胞的增殖。为了进一步研究其抑制机理,本课题通过对Th1/Th2细胞因子和HO-1保护性基因进行研究,发现Physalin H通过上调HO-1表达,抑制Thl型细胞因子分泌,促进Th2型细胞因子分泌,进而调整Th1/Th2平衡。体内研究发现Physalin H显著抑制小鼠耳廓肿胀程度和体内炎症细胞因子Interleukin-2和nterleukin-6的分泌。

全文目录

摘要  5-6
Abstract  6-11
第1章绪论  11-20
  1.1 自身免疫性疾病  11-13
    1.1.1 常见自身免疫性疾病  11-12
    1.1.2 自身免疫性疾病发病机制  12
    1.1.3 自身免疫性疾病治疗  12-13
  1.2 免疫抑制药物研究进展  13-15
    1.2.1 激素类免疫抑制剂  13
    1.2.2 DNA或RNA合成抑制剂  13-14
    1.2.3 细胞因子合成抑制剂  14
    1.2.4 细胞因子作用抑制剂  14
    1.2.5 生物免疫抑制剂  14
    1.2.6 天然产物提取物免疫抑制剂  14-15
  1.3 酸浆属植物化学成分及其药理活性研究进展  15-17
    1.3.1 酸浆属植物化学成分研究进展  17
    1.3.2 酸浆属植物药理作用研究进展  17
  1.4 研究目标内容创新点和意义  17-20
    1.4.1 研究目标  17-18
    1.4.2 研究内容  18-19
    1.4.3 创新点  19
    1.4.4 研究意义  19-20
第2章实验材料与方法  20-28
  2.1 实验材料  20-24
    2.1.1 实验动物  20
    2.1.2 实验药品  20
    2.1.3 常用试剂  20-21
    2.1.4 仪器与设备  21-22
    2.1.5 生化试剂配制  22-24
  2.2 常用实验方法  24-28
    2.2.1 小鼠脾淋巴细胞的分离及培养  24-25
    2.2.2 琼脂糖凝胶电泳  25
    2.2.3 Western blotting  25-26
    2.2.4 细胞RNA的抽提  26
    2.2.5 RNA的反转录  26-27
    2.2.6 细胞蛋白的提取  27-28
第3章酸浆属有效单体成分的筛选研究  28-36
  3.1 引言  28-29
  3.2 材料与方法  29-31
    3.2.1 实验动物  29
    3.2.2 仪器  29
    3.2.3 试剂  29
    3.2.4 实验方法  29-30
      3.2.4.1 药物的细胞毒性检测  29-30
      3.2.4.2 药物的免疫抑制活性检测  30
      3.2.4.3 药物对MLR的作用  30
    3.2.5 统计学方法  30-31
  3.3 实验结果  31-34
    3.3.1 药物的细胞毒性  31-32
    3.3.2 药物抑制ConA激活的小鼠脾细胞增殖  32-34
    3.3.3 Physalin H抑制混合淋巴细胞反应  34
  3.4 讨论  34-36
第4章 Physalin H的时效性及其对细胞周期的影响  36-42
  4.1 引言  36
  4.2 材料与方法  36-37
    4.2.1 实验动物  36
    4.2.2 仪器  36
    4.2.3 试剂  36-37
    4.2.4 实验方法  37
      4.2.4.1 Physalin H的时效型  37
      4.2.4.2 Physalin H对细胞周期的影响  37
    4.2.5 统计学方法  37
  4.3 实验结果  37-40
    4.3.1 Physalin H对细胞抑制作用的时效性  37-38
    4.3.2 Physalin H对细胞周期的影响  38-40
  4.4 讨论  40-42
第5章 Physalin H对T淋巴细胞细胞亚型的影响  42-46
  5.1 引言  42
  5.2 材料与方法  42-43
    5.2.1 实验动物  42
    5.2.2 仪器  42-43
    5.2.3 试剂  43
    5.2.4 实验方法  43
    5.2.5 统计学方法  43
  5.3 实验结果  43-45
  5.4 讨论  45-46
第6章 Physalin H对Th1/Th2细胞因子平衡的影响  46-51
  6.1 引言  46
  6.2 材料与方法  46-47
    6.2.1 实验动物  46
    6.2.2 仪器  46
    6.2.3 试剂  46-47
    6.2.4 实验方法  47
    6.2.5 统计学方法  47
  6.3 实验结果  47-50
    6.3.1 Physalin H对细胞上清中Thl细胞因子IL-2和IFN-γ分泌水平的影响  47-48
    6.3.2 Physalin H对细胞上清中Th2细胞因子IL-4和IL-10分泌水平的影响  48-50
  6.4 讨论  50-51
第7章 Physalin H对T细胞中HO-1表达的影响  51-59
  7.1 引言  51
  7.2 材料与方法  51-56
    7.2.1 实验动物  51
    7.2.2 仪器  51-52
    7.2.3 试剂  52
    7.2.4 实验方法  52-55
      7.2.4.1 总蛋白的提取和定量  52-53
      7.2.4.2 Western印迹法测定Physalin H对蛋白HO-1表达的影响  53-54
      7.2.4.3 RT-PCR法检测Physalin H对HO-1基因的转录变化  54-55
    7.2.5 统计学方法  55-56
  7.3 实验结果  56-58
    7.3.1 Physalin H对T淋巴细胞中HO-1蛋白表达的影响  56-57
    7.3.2 Physalin H对T淋巴细胞中HO-1 mRNA表达的影响  57-58
  7.4 讨论  58-59
第8章 Physalin H对小鼠体内炎症的影响  59-63
  8.1 引言  59
  8.2 材料与方法  59-61
    8.2.1 实验动物  59
    8.2.2 仪器  59
    8.2.3 试剂  59
    8.2.4 实验方法  59-60
      8.2.4.1 小鼠耳廓肿胀的体内实验  59-60
      8.2.4.2 ELISA方法检测耳廓肿胀模型小鼠的血清中细胞因子IL-2、IL-6  60
    8.2.5 统计学方法  60-61
  8.3 实验结果  61-62
    8.3.1 Physalin H对小鼠耳肿胀的抑制作用  61-62
    8.3.2 Physalin H作用后血清中细胞因子的变化  62
  8.4 讨论  62-63
第9章结论  63-65
参考文献  65-69
致谢  69-70
论文发表情况  70
专利申请情况  70-71
卷内备考表  71

酸浆属植物中免疫抑制活性物质的筛选及药理学研究

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