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当归含药血清对H_2O_2诱导人脐静脉内皮细胞氧化损伤模型细胞活性影响

作　者: 李培友
导　师: 周亚滨
学　校: 黑龙江中医药大学
专　业: 中医内科学
关键词: 当归人脐静脉内皮细胞心绞痛不稳定型
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的:通过观察养心汤中单味中药当归含药血清对体外培养的过氧化氢(H2O2)诱导的人脐静脉内皮细胞活性的影响,探讨当归对内皮细胞作用的可能机制,为进一步研究养心汤防治不稳定型心绞痛的确切作用机制,为临床应用提供客观依据。方法:采用含药血清制备的方法,将20只Wistar大鼠随机分为2组,分别为当归组和空白组,当归组给予当归水煎剂灌胃,空白组给予等剂量生理盐水,每日灌胃给药2次,连续给药1周,于末次给药后1h心脏取血,分离血清,配制含药血清培养液。采用体外细胞培养的方法,将冻存HUVEC复苏、培养、并且传代。待细胞状态稳定后,将细胞消化、收集、计数,以每孔2×104cells接种于96孔培养板,分为5组,分为H2O2模型组,空白血清组,2%当归含药血清组,4%当归含药血清组,6%当归含药血清组,每组6个附孔。当归各组用不同浓度的当归含药血清干预24h,空白组和H2O2模型组用空白血清培养液培养24小时。再用浓度100μmol/L的H2O2干预人脐静脉内皮细胞2h(除空白组除外),复制细胞氧化损伤模型。采用倒置荧光数字成像显微镜下观察细胞形态变化,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力。结果:1、正常内皮细胞培养传代形态学结果表明,人脐静脉内皮细胞呈单层贴壁生长。逐渐呈铺路石样或鹅卵石样外观。传代细胞比原代细胞贴壁早,伸展快。2、各处理组形态学结果表明,除空白组,各处理组均出现体积收缩变小或肿胀,间隙变大,细胞脱落,细胞变形、皱缩,细胞分布较杂乱;2%、4%、6%当归含药血清组较模型组细胞损伤减轻,细胞脱落减少,细胞变形、皱缩的程度不同程度减轻。3、MTT法检测结果表明,各当归含药血清组细胞吸光度值(OD值)均明显升高,与空白组、模型组相比,差异均有统计学意义(P<0.01)。各当归含药血清组细胞增殖率(%)均明显升高,与模型组相比,差异有统计学意义(P<0.01),且存在明显的浓度依赖关系。结论:养心汤中单味中药当归含药血清具有一定的抗氧化作用,能够在一定程度上保护内皮细胞结构和功能的完整性,逆转和改善内皮功能损伤,进而保护细胞免受过氧化损伤。这可能是养心汤防治不稳定型心绞痛的作用机制之一。

全文目录

缩略语表  5-6
中文摘要  6-8
Abstract  8-10
前言  10-11
文献综述  11-30
  一、对不稳定型心绞痛的认识及研究进展  11-27
    （一）祖国医学对不稳定型心绞痛的认识及研究进展  11-19
    （二）现代医学对不稳定型心绞痛的认识及研究进展  19-27
  二、中药含药血清的研究现状  27-28
  三、细胞培养的研究现状  28-30
材料与方法  30-35
  一、实验材料  30-31
    （一）实验细胞  30
    （二）实验动物  30
    （三）实验药物  30
    （四）主要试剂  30
    （五）主要仪器  30-31
  二、实验方法  31-34
    （一）主要试剂配制  31
    （二）细胞复苏  31-32
    （三）细胞培养及传代  32
    （四）当归含药血清制备  32-33
    （五）模型制备及分组  33
    （六）观测指标及方法  33-34
  三、统计方法  34-35
结果  35-39
  一、含药血清观察结果  35
  二、正常内皮细胞的培养与传代  35
    形态学观察结果  35
  三、当归含药血清对血管内皮细胞活性的影响  35-39
    （一）形态学观察结果  35-36
    （二） MTT 法检测血管内皮细胞的增殖存活情况  36-39
讨论  39-48
  一、关于含药血清的制备  39-40
  二、关于模型的建立  40-41
  三、关于 MTT 法  41-42
  四、益气养血、养心安神的确立  42-43
  五、关于养心汤的组方分析及选药原则  43-45
  六、关于当归含药血清对血管内皮细胞活性的影响  45-47
  七、展望  47-48
结论  48-49
致谢  49-50
参考文献  50-57
附图  57-58
攻读硕士学位期间发表的论文  58-59
个人简历  59-60
详细摘要  60-61

当归含药血清对H_2O_2诱导人脐静脉内皮细胞氧化损伤模型细胞活性影响

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