学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

细粒棘球蚴谷胱甘肽s-转移酶免疫保护力观察及其免疫机制的研究

作　者: 雄英
导　师: 赵巍
学　校: 宁夏医科大学
专　业: 遗传学
关键词: 细粒棘球蚴谷胱甘肽s-转移酶免疫保护力免疫机制
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 30次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

目的在已克隆并成功构建细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,Eg)重组原核表达质粒pET-28a/GST的基础上,表达并纯化出重组蛋白Eg.GST,进行动物免疫保护力实验及免疫机制研究,以鉴定其疫苗的潜质。方法(1)重组表达质粒的诱导表达及纯化:IPTG诱导表达重组蛋白EgGST(rEgGST),经含Ni2+的His-bind树脂柱纯化rEgGST。(2)动物分组及免疫方案:选取132只雌性6周龄ICR小鼠随机分为3组即实验组、佐剂+PBS组和PBS组,每组44只;采用背部皮下多点注射,连续免疫3次,每次间隔两周;免疫小鼠10周后,每只小鼠用1500个活原头蚴腹腔注射进行攻击感染。分别于免疫前和攻击后的0周、2周、4周、6周、10周、18周、30周剖杀小鼠,并且眼眶取血分离血清。(3)rEgGST诱导小鼠的免疫保护力的计算:根据Dempster公式:免疫保护力(%)=(1-免疫组平均包囊数/对照组平均包囊数)×100﹪,计算免疫保护力(4)rEgGST诱导小鼠的免疫保护力及其机制研究:①通过ELISA方法对rEgGST诱导小鼠体液免疫指标的变化进行研究;②通过流式技术对rEgGST诱导小鼠细胞免疫指标的变化进行研究;③rEgGST诱导小鼠细胞因子变化的研究及MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖情况。结果(1):将已经构建的基因工程菌株Eg.GST/pET-28a/BL21(DE3) plysS,表达并纯化出分子量约28kD的重组EgGST。(2):根据公式计算rEgGST能诱导小鼠产生89.39%的免疫保护力。(3)①rEgGST组小鼠在抗原免疫后和攻击感染后均产生高水平的IgG、低水平的IgG1和IgE,IgG2a、IgG2b和IgG3抗体水平与免疫前相比是升高的,提示IgG、IgG3、IgG2a和IgG2b可能参与保护性的免疫应答机制。②rEgGST组小鼠在攻击感染后不仅CD4+T细胞增加,CD8+T细胞也有轻度增加,CD4+/CD8+比值与PBS对照组比较有所降低;在攻击感染后30周rEgGST组的CD25+细胞和佐剂组与空白组相比差异具有显著性,而实验组与对照组之间无显著性差异。③rEgGST组小鼠在免疫后产生高水平的IL-2、IFN-γ和TNF-α,低水平的IL-4和IL-10;攻击感染后期IL-2、IFN-γ和TNF-α降低,IL-4和IL-10上升。提示该重组抗原以诱导Th1型免疫应答为主的反应;同时攻击感染后进行脾淋巴细胞增殖试验,MTT法检测证实rEgGST免疫的小鼠在rEgGST刺激下脾淋巴细胞增殖水平明显高于PBS对照组(P<0.01)。结论( 1):成功表达并纯化出rEgGST。(2):rEgGST能诱导小鼠产生89.39%的免疫保护力,提示rEgGST蛋白能诱导机体产生较强的保护力,是一个极具潜力的抗包虫病疫苗候选分子。(3):rEgGST保护性免疫主要通过诱导宿主产生体液免疫应答和Th1型免疫应答,表明rEgGST是具有发展前途的抗包虫病候选疫苗。

细粒棘球蚴谷胱甘肽s-转移酶免疫保护力观察及其免疫机制的研究

内容摘要

全文目录

相似论文