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JNK与ERK1/2信号通路在NaAsO_2诱导骨髓间充质干细胞中的作用

作 者: 李媛媛
导 师: 慕晓玲;姜玉峰
学 校: 石河子大学
专 业: 人体解剖与组织胚胎学
关键词: 亚砷酸钠 JNK ERK1/2 JNK/ERK1/2抑制剂 骨髓间充质干细胞
分类号: R346
类 型: 硕士论文
年 份: 2010年
下 载: 22次
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内容摘要


目的探讨亚砷酸钠(NaAsO2)对小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖和凋亡的影响,并研究MAPK家族中c-jnk氨基末端激酶(JNK)和细胞外信号调节激酶(ERK1/2)信号通路在NaAsO2诱导BMSCs细胞效应中的作用。方法不同浓度NaAsO2作用小鼠BMSCs24h、48h后,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测细胞活力, Annexin V/PI检测细胞凋亡率。不同浓度NaAsO2作用小鼠BMSCs24h, Western-blot检测JNK、ERKl/2、磷酸化JNK、磷酸化ERK1/2表达水平。预先用JNK抑制剂SP600125、ERK1/2抑制剂PD98059处理BMSCs细胞30min,然后分别用不同浓度NaAsO2作用BMSCs细胞24h、48h后,MTT检测细胞活力, Annexin V/PI检测细胞凋亡率。结果(1)NaAsO2对BMSCs增殖活性的影响:NaAsO2浓度小于2μmol/L时对BMSCs有促增殖作用(p>0.05),NaAsO2浓度大于8μmol/L抑制细胞增殖⑦<0.01),其增殖抑制率随着NaAsO2浓度的增加及作用时间的延长而增加,具有一定剂量-效应关系。(2)NaAsO2对BMSCs中JNK、ERK1/2磷酸化水平的影响:JNK磷酸化水平随着NaAsO2浓度的增加表达明显增强,8μmol/L时表达最强(P<0.05);ERK1/2磷酸化水平随着NaAsO2浓度的增加表达明显减低,2、4μmol/L时表达较强,8μmol/L时表达明显减弱(p<0.05).(3)JNK、ERK1/2抑制剂对NaAsO2所致BMSCs增殖活性的影响:JNK抑制剂可明显降低高浓度16、32μmol/L NaAsO2的生长抑制作用(p<0.05);ERK1/2抑制剂可抑制低浓度1、2μmol/L NaAsO2对BMSCs的促增殖作用(p<0.05)。(4)对BMSCs凋亡率的影响:不同浓度NaAsO2作用BMSCs24、48h后,细胞凋亡率随着浓度的增高而增加。JNK抑制剂组凋亡率低于无抑制组,且在4μmol/L时作用明显(p<0.05);ERK1/2抑制剂组凋亡率高于无抑制组,在8μmol/L时出现大量细胞碎片(p<0.05)。结论:低浓度NaAsO2激活ERK1/2信号通路,增加细胞活力,可被抑制剂PD98059阻断;高浓度NaAsO2激活JNK信号通路,增加细胞凋亡率,可被抑制剂SP600125阻断。JNK、ERK1/2信号通路在不同浓度NaAsO2引起细胞增殖与凋亡变化中发挥重要作用。NaAsO2的作用机制可能与JNK、ERK1/2信号通路作用相关。

全文目录


摘要  6-7
Abstract  7-8
英文缩略图  8-9
前言  9-11
材料与方法  11-20
  1 实验材料  11-16
  2 实验方法  16-19
    2.1 骨髓间充质干细胞的培养  16-17
    2.2 四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测BMSC生长变化  17
    2.3 采用Western-blot法检测JNK、ERK磷酸化水平  17-19
    2.4 流式细胞仪检测细胞凋亡情况  19
  3 统计分析  19-20
结果  20-30
  1 BMSC的分离纯化与鉴定  20-22
  3 NaAsO_2对BMSC中JNK、ERK1/2磷酸化表达水平的影响  22-30
讨论  30-33
结论  33-34
参考文献  34-37
文献综述  37-43
  参考文献  41-43
致谢  43-44
作者简介  44-45
导师评阅表  45

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 人体生物化学、分子生物学
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