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蛋白质硝化及抑制评价体系的建立

作 者: 陈攀
导 师: 梁菊
学 校: 河南科技大学
专 业: 药理学
关键词: 蛋白质硝化 褪黑素 芦丁 原花青素 糖尿病
分类号: R587.1
类 型: 硕士论文
年 份: 2010年
下 载: 16次
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内容摘要


过氧亚硝酸(ONOO-)是细胞内一种重要的活性氧物种,在体内一旦生成,就会对蛋白质、脂质、DNA等生物大分子造成氧化损伤。其中,蛋白质硝基化是过氧亚硝酸在体内损伤的主要途径,其产物3-硝基酪氨酸(3-NT)是目前公认的体内损伤标志物,在多种病变组织中都检测到了它的存在。所以建立蛋白质硝化及抑制评价体系具有重要的研究意义。本文以牛血清白蛋白为硝化底物、过氧亚硝酸为硝化试剂,以褪黑素为硝化抑制剂建立了蛋白质硝化及抑制评价体系。在此基础上,选用多酚类化合物芦丁原花青素作为硝化抑制剂对体系进行了验证。最后,以SD糖尿病大鼠为动物模型,探讨了褪黑素对糖尿病的防治及对肾脏的保护作用。实验结果表明,在37℃、pH7.2的PBS介质中反应90min,且牛血清白蛋白与过氧亚硝酸的浓度比为1:18时,硝基化反应进行的比较完全。在该实验条件下,在反应体系中引入褪黑素、芦丁和原花青素。结果发现三种抗氧化剂都能一定程度地抑制硝基化反应,同浓度下,抑制能力依次为:褪黑素>原花青素>芦丁,最大抑制率分别为:80.7%,66.9%,38.7%。初步的抑制机理研究表明,三种抗氧化剂抑制硝化反应的机理是清除自由基而非还原硝化产物。动物实验结果表明,造模成功后,糖尿病大鼠的肾脏出现损伤。经过褪黑素治疗后,脏器系数降低,糖尿病症状有所减轻。在组织和血清中,干预组(DM+M)大鼠的NO2-+NO3-含量和MDA含量均明显低于糖尿病组(DM),说明褪黑素能抑制糖尿病的氧化应激反应,有缓解糖尿病的作用。

全文目录


摘要  2-3
ABSTRACT  3-8
第1章 蛋白质硝化与疾病的关系  8-18
  1.1 蛋白质硝化与疾病的关系  8-11
    1.1.1 蛋白质硝化的产生和危害  8-9
    1.1.2 蛋白质硝化与疾病的关系  9-10
    1.1.3 蛋白质硝化与糖尿病的关系  10-11
  1.2 蛋白质硝化抑制研究概况  11-12
    1.2.1 蛋白质硝化抑制的途径  11
    1.2.2 有效的抑制剂  11-12
  1.3 三种抑制剂简介  12-17
    1.3.1 褪黑素  12-14
    1.3.2 芦丁  14-15
    1.3.3 原花青素  15-17
  1.4 立题思路  17-18
第2章 体外硝化反应模型的建立  18-26
  2.1 引言  18
  2.2 实验部分  18-20
    2.2.1 主要试剂和仪器  18-19
    2.2.2 ONOO~-的制备  19-20
    2.2.3 实验方案  20
  2.3 实验结果与讨论  20-25
    2.3.1 相关反应物及产物的紫外吸收图谱  20-22
    2.3.2 最佳反应温度的确定  22-23
    2.3.3 最佳反应时间的探讨  23-24
    2.3.4 过氧亚硝酸浓度的影响  24
    2.3.5 催化剂最佳浓度的探索  24-25
  2.4 本章小结  25-26
第3章 体外蛋白质硝化抑制实验研究  26-40
  3.1 引言  26-27
  3.2 实验部分  27-28
    3.2.1 主要试剂  27
    3.2.2 储备液的配制  27
    3.2.3 实验方案  27-28
  3.3 结果和讨论  28-35
    3.3.1 抑制剂的紫外吸收图谱  28-29
    3.3.2 加入抗氧化剂最佳时间的探讨  29-30
    3.3.3 抑制率与抗氧化剂浓度的关系  30-33
    3.3.4 抗氧化剂的能力强弱的相互对比  33-35
    3.3.5 加催化剂后OPC 的抑制率及与MT 的对比  35
  3.4 抑制ONOO~-引起蛋白质硝化反应机理的研究  35-39
    3.4.1 改变加入顺序  35-36
    3.4.2 Fenton 反应  36-38
    3.4.3 与ONOO~-反应  38-39
  3.5 本章小结  39-40
第4章 糖尿病模型的建立与蛋白质硝化抑制的研究  40-48
  4.1 引言  40
  4.2 实验部分  40-43
    4.2.1 主要试剂与仪器  40-41
    4.2.2 主要溶液的配制  41
    4.2.3 饲育条件  41
    4.2.4 动物分组  41-42
    4.2.5 实验方案  42
    4.2.6 糖尿病造模  42
    4.2.7 观察指标  42
    4.2.8 组织取材及匀浆  42
    4.2.9 组织匀浆的制作  42-43
    4.2.10 组织匀浆中一氧化氮(NO)的测定  43
    4.2.11 组织匀浆中MDA 的测定  43
    4.2.12 数据处理  43
  4.3 结果与讨论  43-46
    4.3.1 日常观察结果  43
    4.3.2 体重变化和摄食情况  43-44
    4.3.3 脏器系数比较  44-45
    4.3.4 各组组织匀浆中一氧化氮(NO)的测定结果  45
    4.3.5 组织匀浆中MDA 的测定结果  45-46
  4.4 本章小结  46-48
    4.4.1 糖尿病模型的建立  46-47
    4.4.2 MT 对肾脏的保护作用  47-48
第5章 结论  48-50
参考文献  50-54
缩略语词汇表  54-55
致谢  55-56
攻读硕士学位期间的研究成果  56

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 内分泌腺疾病及代谢病 > 胰岛疾病 > 糖尿病
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