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蛋白质硝化及抑制评价体系的建立
作 者: 陈攀
导 师: 梁菊
学 校: 河南科技大学
专 业: 药理学
关键词: 蛋白质硝化 褪黑素 芦丁 原花青素 糖尿病
分类号: R587.1
类 型: 硕士论文
年 份: 2010年
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内容摘要
过氧亚硝酸(ONOO-)是细胞内一种重要的活性氧物种,在体内一旦生成,就会对蛋白质、脂质、DNA等生物大分子造成氧化损伤。其中,蛋白质硝基化是过氧亚硝酸在体内损伤的主要途径,其产物3-硝基酪氨酸(3-NT)是目前公认的体内损伤标志物,在多种病变组织中都检测到了它的存在。所以建立蛋白质硝化及抑制评价体系具有重要的研究意义。本文以牛血清白蛋白为硝化底物、过氧亚硝酸为硝化试剂,以褪黑素为硝化抑制剂建立了蛋白质硝化及抑制评价体系。在此基础上,选用多酚类化合物芦丁和原花青素作为硝化抑制剂对体系进行了验证。最后,以SD糖尿病大鼠为动物模型,探讨了褪黑素对糖尿病的防治及对肾脏的保护作用。实验结果表明,在37℃、pH7.2的PBS介质中反应90min,且牛血清白蛋白与过氧亚硝酸的浓度比为1:18时,硝基化反应进行的比较完全。在该实验条件下,在反应体系中引入褪黑素、芦丁和原花青素。结果发现三种抗氧化剂都能一定程度地抑制硝基化反应,同浓度下,抑制能力依次为:褪黑素>原花青素>芦丁,最大抑制率分别为:80.7%,66.9%,38.7%。初步的抑制机理研究表明,三种抗氧化剂抑制硝化反应的机理是清除自由基而非还原硝化产物。动物实验结果表明,造模成功后,糖尿病大鼠的肾脏出现损伤。经过褪黑素治疗后,脏器系数降低,糖尿病症状有所减轻。在组织和血清中,干预组(DM+M)大鼠的NO2-+NO3-含量和MDA含量均明显低于糖尿病组(DM),说明褪黑素能抑制糖尿病的氧化应激反应,有缓解糖尿病的作用。
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全文目录
摘要 2-3 ABSTRACT 3-8 第1章 蛋白质硝化与疾病的关系 8-18 1.1 蛋白质硝化与疾病的关系 8-11 1.1.1 蛋白质硝化的产生和危害 8-9 1.1.2 蛋白质硝化与疾病的关系 9-10 1.1.3 蛋白质硝化与糖尿病的关系 10-11 1.2 蛋白质硝化抑制研究概况 11-12 1.2.1 蛋白质硝化抑制的途径 11 1.2.2 有效的抑制剂 11-12 1.3 三种抑制剂简介 12-17 1.3.1 褪黑素 12-14 1.3.2 芦丁 14-15 1.3.3 原花青素 15-17 1.4 立题思路 17-18 第2章 体外硝化反应模型的建立 18-26 2.1 引言 18 2.2 实验部分 18-20 2.2.1 主要试剂和仪器 18-19 2.2.2 ONOO~-的制备 19-20 2.2.3 实验方案 20 2.3 实验结果与讨论 20-25 2.3.1 相关反应物及产物的紫外吸收图谱 20-22 2.3.2 最佳反应温度的确定 22-23 2.3.3 最佳反应时间的探讨 23-24 2.3.4 过氧亚硝酸浓度的影响 24 2.3.5 催化剂最佳浓度的探索 24-25 2.4 本章小结 25-26 第3章 体外蛋白质硝化抑制实验研究 26-40 3.1 引言 26-27 3.2 实验部分 27-28 3.2.1 主要试剂 27 3.2.2 储备液的配制 27 3.2.3 实验方案 27-28 3.3 结果和讨论 28-35 3.3.1 抑制剂的紫外吸收图谱 28-29 3.3.2 加入抗氧化剂最佳时间的探讨 29-30 3.3.3 抑制率与抗氧化剂浓度的关系 30-33 3.3.4 抗氧化剂的能力强弱的相互对比 33-35 3.3.5 加催化剂后OPC 的抑制率及与MT 的对比 35 3.4 抑制ONOO~-引起蛋白质硝化反应机理的研究 35-39 3.4.1 改变加入顺序 35-36 3.4.2 Fenton 反应 36-38 3.4.3 与ONOO~-反应 38-39 3.5 本章小结 39-40 第4章 糖尿病模型的建立与蛋白质硝化抑制的研究 40-48 4.1 引言 40 4.2 实验部分 40-43 4.2.1 主要试剂与仪器 40-41 4.2.2 主要溶液的配制 41 4.2.3 饲育条件 41 4.2.4 动物分组 41-42 4.2.5 实验方案 42 4.2.6 糖尿病造模 42 4.2.7 观察指标 42 4.2.8 组织取材及匀浆 42 4.2.9 组织匀浆的制作 42-43 4.2.10 组织匀浆中一氧化氮(NO)的测定 43 4.2.11 组织匀浆中MDA 的测定 43 4.2.12 数据处理 43 4.3 结果与讨论 43-46 4.3.1 日常观察结果 43 4.3.2 体重变化和摄食情况 43-44 4.3.3 脏器系数比较 44-45 4.3.4 各组组织匀浆中一氧化氮(NO)的测定结果 45 4.3.5 组织匀浆中MDA 的测定结果 45-46 4.4 本章小结 46-48 4.4.1 糖尿病模型的建立 46-47 4.4.2 MT 对肾脏的保护作用 47-48 第5章 结论 48-50 参考文献 50-54 缩略语词汇表 54-55 致谢 55-56 攻读硕士学位期间的研究成果 56
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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 内分泌腺疾病及代谢病 > 胰岛疾病 > 糖尿病
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