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砷对胰岛素依赖性葡萄糖转运的影响

作　者: 张冰荫
导　师: 慕晓玲
学　校: 石河子大学
专　业: 人体解剖与组织胚胎学
关键词: 3T3-L1前脂肪细胞分化三氧化二砷胰岛素抵抗机制
分类号: R587.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的：不同浓度砷(NaAsO2)对胰岛素依赖性葡萄糖转运的影响,并进一步探讨其可能的作用机制。方法：(1)诱导3T3-L1前脂肪细胞分化；油红O染色鉴定成熟脂肪细胞：提取油红O染液,在分光光度计490nm波长处检测吸光度(A)定量分析砷对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响；(2)MTT检测砷对3T3-L1前脂肪细胞和成熟脂肪细胞增殖能力和活力的影响；(3)葡萄糖氧化酶法检测砷对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖消耗量的影响；(4)免疫荧光细胞化学法检测砷对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)的移位的影响；(5)Western-blot检测砷对3T3-L1脂肪细胞GLUT4和NF.kBp65的表达的影响；(6)Elisa检测砷对3T3-L1脂肪细胞冈子IL-6,IL-8和TNF-a的表达含量的影响。结果：(1)3T3-L1前脂肪细胞呈成纤维样贴壁生长,诱导分化为成熟的脂肪细胞后用油红O染色,结果显示有红色脂滴,确定是脂肪细胞。分光光度计检测止常组和砷组吸光值,结果砷组油红O吸光值(0.34±0.05)明显低于正常组(0.78±0.13),两者之间差异有统计学意义(p<0.05)；(2)不同浓度AS203对3T3-L1前脂肪和脂肪细胞生K增殖和活性的影响：结果低浓度砷(5μmol/L以下)对3T3.L1前脂肪细胞的增殖表现为促进作用,相反,高于此浓度时抑制细胞的增殖；不同浓度砷对3T3-Ll前脂肪细胞分化均表现为抑制,和正常组相比,差异具有统计学意义(p<0.051,并呈一定的量效关系。(3)不同浓度砷(1、5、10、15、20μmol/L)作用于3T3-L1脂肪细胞均抑制脂肪细胞葡萄糖消耗,作用48h葡萄糖消耗量分别为4.57±0.72、2.99±0.64、2.32±0.53、2.00±0.66、1.56±0.29且均低于正常组(p<0.05),葡萄糖消耗量随砷浓度的增加而减少(P<0.05)。在1μmol/L胰岛素刺激下,染砷组3T3-L1脂肪细胞对葡萄糖的消耗量与胰岛素组相比有统计学意义(P<O.01)。(4)利止常组相比,砷染毒组3T3-L1脂肪细胞GLUT4的转位受到阻滞,在胰岛素刺激的情况一卜,染砷组细胞GLUT4在胞膜上的荧光颗粒也明显低于胰岛素组(P<0.01)。(5)砷抑制GLUT4蛋白的表达(P<0.05)和促进核因子NF.kBp65的表达(p<0.01)：(6)IL-6、IL-8和TNF-α的表达随砷浓度的增加及作用时间(24、48、72h)的延长而增加(p<0.05),并且呈量效关系。结论：(1)3T3-L1前脂肪细胞成功诱导分化为3T3-L1脂肪细胞；(2)在3T3-L1脂肪细胞,低浓度砷(5μmol/L以下)可以促进3T3-L1前脂肪细胞的增殖,高浓度砷抑制其增殖；不同浓度砷对3T3-L1前脂肪细胞的分化都产生抑制作用。(3)砷抑制脂肪细胞对葡萄糖的消耗以及GLUT4的转位和表达；(4)砷降低胰岛素的敏感性而诱发胰岛素抵抗,其分子机制可能与核因于NF-κBp65,IL-6,IL-8和TNF-a的高表达有关联。

全文目录

摘要  6-7
Abstract  7-8
中英文缩写一览表  8-9
前言  9-11
材料与方法  11-23
结果  23-34
讨论  34-37
结论  37-38
参考文献  38-41
文献综述  41-47
  参考文献  45-47
致谢  47-48
作者简历  48-49
导师评阅表  49

砷对胰岛素依赖性葡萄糖转运的影响

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