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MMP-3多态性与乳腺癌关联分析及龙泉复方抗肿瘤机制研究

作　者: 胡文娟
导　师: 张惟杰；李劲
学　校: 中南民族大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: MMP-3 乳腺癌单核苷酸多态性关联分析龙泉复方抗肿瘤中药血清
分类号: R737.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

本研究分为两大部分:其一,MMP-3基因多态性与乳腺癌的关联分析;其二,中药龙泉复方抗肿瘤机制的研究。以下分别概括:1.乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,MMPs是基质金属蛋白酶,具有降解细胞外基质等功能,发现在多种肿瘤的发生和侵染过程中发挥重要作用。本研究旨在探讨MMP-3基因单核苷酸多态性与乳腺癌的关联关系。选择MMP-3基因启动子区-1171 5A/6A、2号外显子rs679620(Lys45Glu)、5号外显子rs41357345(Arg248Trp)等3个SNPs位点作为研究对象,利用PCR-RFLP的方法对外周血样品各个位点进行基因分型,以湖北省武汉市散发乳腺癌病例195人和湖北武汉正常人群235人做病例-对照分析。统计结果发现,rs41357345在所选择的样品中全为C/C型,没有呈现多态性。-1171 5A/6A和rs679620两位点在病例组和对照组的基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡,单位点SNPs与乳腺癌的关联呈阴性(P≥0.05)。-1171 5A/6A和rs679620两位点连锁不平衡(D’=0.763,r2=0.187)。计算单倍型频率并分析发现,-1171 5A/6A和rs679620两位单倍型频率在对照组和病例组没有显著差异(Global P值为0.747)。-1171 5A/6A和rs679620两位点多态性可能与乳腺癌的遗传易感没有显著的关联。由于选择的病例组和对照组的样本均较少,使得研究的统计效力较低;并且实验中选择的SNPs位点数也较少,不能整体代表MMP-3基因的多态性;所以MMP-3基因多态性与乳腺癌的关联关系还需进一步的研究。2.湖北省肿瘤医院中西医结合科应用“龙泉复方制剂”治疗多种癌症。“龙泉复方”主要是由喜树果、龙葵、马钱子、山慈菇、紫菀、青黛、石上柏、灵芝和黄芪等九味中草药构成。本研究旨在探寻中药龙泉复方的抗肿瘤机制,为中药理论提供一定的理论基础。本研究从植物化学和药物血清生理学两个方面着手。很多生物碱具有抗肿瘤功能,并且龙泉复方的中药材中,喜树果、龙葵、马钱子、山慈菇和紫菀中富含生物碱。利用常规的生物碱提取方法溶剂萃取法,分别获得喜树果总碱、龙葵总碱、山慈菇总碱、紫菀总碱和龙泉复方总碱。据MTT实验发现,单方总碱均具有很强的抗肿瘤作用,而复方总碱抑制肿瘤细胞生长的能力较弱。以家兔为实验动物,制备中药龙泉复方制剂的含药血清,根据MTT实验,含药血清具有很强的体外抑制肿瘤细胞生长作用。生物碱是龙泉复方抗肿瘤的有效成分之一。复方总碱体外抗肿瘤能力弱,可能是由于在复方乙醇浸提和萃取过程中,发生了复杂的化学反应,使得有效成分活性减低。中药血清模拟人体消化吸收中药复方的过程,体外实验表明中药抗肿瘤一部分是药物可以直接杀死肿瘤细胞;然而更重要的一部分是,中药在人体经吸收后产生的各种分子或蛋白,通过刺激人体免疫系统表现出更好的抗肿瘤作用。中药在人体内的吸收和对各种人体或细胞调控机制的影响,还需要进一步的研究。

全文目录

摘要  5-7
ABSTRACT  7-12
第一章绪论  12-34
  1.1 乳腺癌的基础研究  12-23
    1.1.1 乳腺癌的流行病学特征  12
    1.1.2 乳腺癌的发病风险因素  12-15
      1.1.2.1 遗传因素  14
      1.1.2.2 环境因素  14-15
    1.1.3 乳腺癌的遗传易感性研究  15-23
      1.1.3.1 乳腺癌的遗传易感基因  15-19
      1.1.3.2 单核苷酸多态性与乳腺癌  19-23
  1.2 基质金属蛋白酶家族(MMPs)的研究  23-29
    1.2.1 基质金属蛋白酶简介  23-24
    1.2.2 MMPs 与肿瘤的研究进展  24-26
    1.2.3 MMP-3 与肿瘤的研究  26-27
    1.2.4 MMP-3 多态性研究  27-29
  1.3 中药龙泉复方的抗肿瘤机制研究进展  29-32
    1.3.1 中药龙泉复方简介  29-30
    1.3.2 中药龙泉复方的天然药物化学研究  30-31
    1.3.3 中药复方的血清药理学研究  31-32
  1.4 本研究的内容、目的及意义  32-34
    1.4.1 本研究的内容  32-33
      1.4.1.1 MMP-3 多态性与乳腺癌的关联分析研究内容  32
      1.4.1.2 龙泉复方抗肿瘤机制研究内容  32-33
    1.4.2 本研究的目的和意义  33-34
      1.4.2.1 MMP-3 多态性与乳腺癌的关联分析的目的和意义  33
      1.4.2.2 龙泉复方抗肿瘤机制研究的目的和意义  33-34
第二章 MMP-3 多态性与乳腺癌的关联分析  34-50
  2.1 引言  34
  2.2 材料与方法  34-40
    2.2.1 样品收集  34
    2.2.2 试剂与设备  34-36
      2.2.2.1 主要试剂  34-35
      2.2.2.2 主要设备  35-36
    2.2.3 DNA 提取  36-37
      2.3.2.1 Chelex-100 法提取全血基因组DNA  36
      2.3.2.2 盐-氯仿法提取凝血基因组DNA  36-37
      2.3.2.3 KI 法提取凝血基因组DNA  37
    2.2.4 SNPs 选择  37-38
    2.2.5 引物设计与限制酶选择  38
    2.2.6 PCR 反应  38-39
    2.2.7 基因分型  39
    2.2.8 统计分析  39-40
    2.2.9 实验技术路线图  40
  2.3 结果  40-44
    2.3.1 基因组DNA 提取结果  40-41
    2.3.2 基因分型结果  41-42
    2.3.3 统计分析结果  42-44
      2.3.3.1 单位点关联分析结果  42-43
      2.3.3.2 单倍型关联分析结果  43-44
  2.4 讨论  44-50
    2.4.1 -1171 5A/6A 与乳腺癌的关联  45-47
    2.4.2 rs679620(Lys45Glu)与乳腺癌的关联  47-48
    2.4.3 单倍型与乳腺癌的关联  48-50
第三章龙泉复方抗肿瘤机制研究  50-61
  3.1 引言  50
  3.2 材料与方法  50-54
    3.2.1 实验材料  50
      3.2.1.1 中药材  50
      3.2.1.2 实验动物与细胞  50
    3.2.2 主要试剂  50-51
    3.2.3 主要设备  51
    3.2.4 实验方法  51-54
      3.2.4.1 混合生物碱的提取  51-52
      3.2.4.2 含药血清的制备  52
      3.2.4.3 体外抗肿瘤MTT 实验  52-54
    3.2.5 实验技术路线图  54
  3.3 结果  54-59
    3.3.1 生物碱提取的得率  54-55
    3.3.2 含药血清制备结果  55
    3.3.3 体外抗肿瘤MTT 实验结果  55-59
      3.3.3.1 确定药物作用时间预实验结果  55-56
      3.3.3.2 生物碱MTT 实验结果  56-57
      3.3.3.3 含药血清MTT 实验结果  57-59
  3.4 讨论  59-61
    3.4.1 生物总碱的抗肿瘤作用  59
    3.4.2 龙泉复方含药血清的抗肿瘤作用  59-61
结论  61-62
参考文献  62-76
致谢  76-77
附录攻读学位期间发表的学术论文目录  77

MMP-3多态性与乳腺癌关联分析及龙泉复方抗肿瘤机制研究

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