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三氧化二砷增强人乳腺癌MCF-7细胞对氯化~(89)锶敏感性的实验研究

作　者: 刘恒超
导　师: 王明明
学　校: 安徽医科大学
专　业: 影像医学与核医学
关键词: 三氧化二砷 锶放射性同位素 乳腺肿瘤 放射增敏剂
分类号: R737.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


目的:本实验观察三氧化二砷（As2O3）联合氯化锶（（89）SrCl2）内照射对体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞增殖、形态学、细胞周期进程、细胞凋亡及bcl-2、bax基因表达的影响,探讨As2O3作为放射增敏剂的可能性,为As2O3与（89）SrCl2联合应用治疗乳腺癌骨转移提供实验依据。方法:（1）将乳腺癌MCF-7细胞接种于含10%小牛血清的RPMI 1640培养基中,37℃、5%CO2传代培养。（2）采用四甲基偶氮唑蓝比色试验法（MTT法）检测As2O3对乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制作用,以药物浓度为横坐标、细胞存活率为纵坐标,通过Excel软件绘制细胞存活曲线并计算出As2O3的半数抑制浓度（IC50）。选取20% IC50以下两个浓度进行放射增敏试验。（3）随机设置对照组、单纯As2O3组、单纯（89）SrCl2组和As2O3+（89）SrCl2组（联合组）,并于处理后24h分别进行不同实验。（4）各实验组细胞置于普通倒置显微镜下观察细胞形态变化并摄相记录。（5）集落形成法观察20% IC50的As2O3对MCF-7细胞的放射增敏作用,计数含50个细胞以上的集落数,求出细胞存活率。以累积吸收剂量为横坐标、细胞存活率为纵坐标,采用“单靶多击模型”拟合细胞存活曲线,计算放射增敏比（SER）。（6）流式细胞术检测各实验组细胞周期分布。（7）流式细胞术检测细胞凋亡。（8）半定量RT-PCR法检测各实验组bcl-2和bax mRNA的表达。（9）Western blot法检测Bcl-2和Bax表达情况。（10）免疫组织化学法观察细胞Bcl-2和Bax蛋白表达情况。结果:（1）MTT法结果表明As2O3对人乳腺癌MCF-7细胞的作用存在剂量依从性,即随药物浓度的增加细胞抑制率增高,其24h IC50为11.7μM。在随后的增敏实验中采用1、2μM （即20% IC50以下）的浓度,此浓度对细胞无毒害作用,可用作增敏实验。（2）光学显微镜观察到单纯（89）SrCl2组和联合组均出现细胞缩小变圆、染色质浓集致密、细胞核固缩等形态学改变,且联合组细胞增殖明显受抑。（3）集落形成实验结果显示,As2O3对人乳腺癌MCF-7细胞有放射增敏作用,联合组的平均致死剂量（D0）及准阈剂量（Dq）均小于单纯（89）SrCl2组,放射增敏比（SER）分别为1.26和1.43。（4）各实验组细胞周期分布有所不同,单纯As2O3或（89）SrCl2处理均能提高G2/M期的细胞比例,而联合组G2/M期的细胞比例显著高于单纯（89）SrCl2组（P<0.05）。（5）细胞凋亡分析结果显示,联合组早期凋亡和死亡细胞比例显著增高,与单纯（89）SrCl2组相比差异显著（P<0.05）。（6）单纯（89）SrCl2组与联合组bcl-2 mRNA相对灰度比值分别为（27.25±3.56）%和（11.47±2.32）%,bax mRNA相对灰度比值无明显差异,而联合组bcl-2/bax比值显著降低（P<0.05）。（7）联合组Bcl-2蛋白相对灰度比值为（12.72±2.16）%,与单纯（89）SrCl2组（33.58±4.54）%相比差异显著（P<0.05）。（8）免疫组化结果显示,Bcl-2和Bax蛋白主要分布在细胞质中。As2O3或（89）SrCl2单独应用均能降低Bcl-2蛋白的表达,联合组的作用更为显著,而Bax蛋白表达无明显变化。结论:5100μM As2O3对人乳腺癌MCF-7细胞具有显著的细胞毒作用,其24h IC50为11.7μM。12μM As2O3可促使MCF-7细胞发生G2期阻滞,提高细胞对（89）SrCl2的放射敏感性,进而增强（89）SrCl2β射线的杀伤作用,其发生机制与诱导细胞凋亡、下调bcl-2的表达并使bcl-2/bax比值降低有关。

全文目录


一、英文缩略词表  6-8
二、中文摘要  8-10
三、英文摘要  10-13
四、论文正文  13-47
  1 前言  13-14
  2、材料与仪器  14-17
  3、实验方法  17-25
  4、结果  25-35
  5、讨论  35-41
  6、结论  41-42
  7、参考文献  42-46
  8、致谢  46-47
五、附录  47-57
  A、个人简介  47-48
  B、攻读学位期间发表论文  48-49
  C、综述  49-57
    参考文献  55-57

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 泌尿生殖器肿瘤 > 乳腺肿瘤
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