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DNA-PKCs与骨肉瘤化疗耐药的相关性研究

作　者: 李金华
导　师: 谭远超；李建民
学　校: 泰山医学院
专　业: 外科学
关键词: 骨肉瘤 DNA-PKCs 顺铂(DDP) DNA-PKCs抑制剂wortmannin 噻唑盐比色法(MTT) 蛋白印迹(Western blot)
分类号: R738.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的研究人骨肉瘤U-2 OS细胞系化疗与DNA-PKCs表达的相关关系,监测人骨肉瘤U-2 OS细胞应用化疗药物顺铂(DDP)、DNA-PKCs抑制剂wortma-nnin及两者合用后细胞活性的变化及DNA-PKCs的表达差异,探讨DNA-PKCs抑制剂wortmannin在人骨肉瘤化疗中的意义,以及应用DNA-PKCs抑制剂如wortmannin处理人骨肉瘤U-2 OS细胞对化疗药物敏感性的影响。方法采用噻唑盐比色法(MTT)检测并比较人骨肉瘤U-2 OS细胞株对顺铂(DDP)、DNA-PKCs抑制剂wortmannin及两者合用的药物敏感性,利用倒置显微镜观察用药干预前后细胞一般大体形态改变；利用蛋白印迹(Western blot)技术检测DNA-PKCs蛋白在人骨肉瘤U-2 OS细胞应用化疗药物顺铂(DDP)、DDP+wortmannin分别培养细胞48小时后细胞中的表达。结果本实验MTT法检测细胞活性,以不同浓度梯度的DDP、Wortmannin及DDP+Wortmannin(两药物浓度梯度同前不变)三组分别干预人骨肉瘤U-2 OS细胞株48 h后,每组该细胞的增殖受抑,呈剂量依赖性,随药物浓度的增大,OD值明显减少,且与对照组相比存在显著性差异(P<0.05),其三组间细胞的增殖受抑程度DDP+Wortmannin>DDP>Wortmannin,顺铂和Wortmannin两者合用诱导人骨肉瘤U-2 OS细胞凋亡而抑制了肿瘤的增殖较其它两组显著,DDP.Wortmannin分别与DDP+Wortmannin进行组间比较,两样本t检验均(P<0.05)。根据前一步的细胞活性检测结果,选用适当浓度DDP、DDP+Wortmannin两组分别处理人骨肉瘤U2-OS细胞48小时后,利用蛋白印迹(Western blot)技术检测DNA-PKCs蛋白表达,结果两组细胞内DNA PKcs蛋白的表达均下调,尤以后者显著,且与对照组两两组间比较t检验(P<0.01)。结论1本试验表明DNA-PKCs抑制剂Wortmannin可以增强顺铂杀伤骨肉瘤细胞的作用,促进顺铂诱导骨肉瘤细胞凋亡,Wortmannin在人骨肉瘤U2-OS细胞对顺铂化疗过程中起到了增敏作用。2在分子水平进一步探讨人骨肉瘤U-2 OS细胞对顺铂化疗耐药机制,提示骨肉瘤细胞对化疗药物耐药与DNA-PKcs的高表达有关,验证了DNA-PKCs的表达可能与骨肉瘤的预后相关的观点。3本实验为改善骨肉瘤化疗疗效提供了一条新的思路,为临床逆转骨肉瘤化疗耐药的进一步研究奠定了基础,有望Wortmannin成为骨肉瘤化疗的一种新药,提高骨肉瘤综合治疗的效率,提高骨肉瘤患者的生存质量。

全文目录

中文摘要  3-5
Abstract  5-7
符号说明  7-9
前言  9-12
材料与方法  12-25
结果  25-29
讨论  29-35
结论  35-36
附图  36-38
参考文献  38-42
综述  42-54
  参考文献  49-54
致谢  54-55

DNA-PKCs与骨肉瘤化疗耐药的相关性研究

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