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哇巴因对急性淋巴细胞白血病细胞增殖和凋亡的影响

作　者: 郭雪梅
导　师: 欧阳建
学　校: 南京医科大学
专　业: 内科学
关键词: 哇巴因白血病增殖凋亡钠钾ATP酶 Bcl-2
分类号: R733.71
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 7次
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内容摘要

目的研究哇巴因对急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞以及原代培养急性淋巴细胞白血病细胞增殖和凋亡的影响,对其机制进行初步探讨。方法用不同浓度哇巴因作用于对数期的急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞株,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测哇巴因对Jurkat细胞株增殖的作用;瑞氏染色观察哇巴因对Jurkat细胞株形态的影响;Annexin V/PI双染流式细胞仪检测不同浓度哇巴因处理细胞的凋亡率;JC-1检测各组细胞的线粒体膜电位变化;用DiBAC4(3)标记不同浓度哇巴因处理的jurkat细胞膜电位,流式细胞仪检测细胞膜电位的变化;免疫荧光检测NKA-α1蛋白表达的变化;Western blot检测Bcl-2的表达;采用密度梯度离心法分离、培养原代急性淋巴细胞白血病细胞,MTT法检测哇巴因对其生长活力的影响,Annexin V/PI双染检测不同浓度哇巴因处理后的凋亡率。结果MTT检测增殖结果表明哇巴因对Jurkat细胞株表现出显著增殖抑制作用,呈时间、剂量依赖性(P<0.05);细胞形态学观察可见哇巴因处理的Jurkat细胞表现出凋亡的形态特征,Annexin V/PI双染检测结果显示浓度为10nmol/L、20nmol/L、50nmol/L的哇巴因处理Jurkat细胞72h凋亡率分别为12.37±0.55%、94.3±0.46%、98.6±0.79%,与对照组相比有显著性差异(P<0.05);JC-1结果表明ouabain诱导jurkat细胞凋亡伴有线粒体膜电位的下降;DiBAC4(3)标记jurkat细胞膜电位发现哇巴因没有引起细胞膜的去极化;免疫荧光结果显示ouabain处理的Jurkat细胞NKA-α1从胞膜向胞浆转移,且表达减少;Western Blot检测哇巴因处理后细胞Bcl-2的表达减少;低浓度哇巴因对原代培养的急性淋巴细胞白血病细胞同样有抑制增殖和诱导凋亡作用。结论Ouabain对急性淋巴细胞白血病细胞的增殖有显著抑制作用,呈时间、剂量依赖性,并可以诱导急性淋巴细胞白血病细胞凋亡。哇巴因诱导Jurkat细胞凋亡,没有抑制NKA的离子转运功能,而是通过与NKA结合,使NKA-α1从胞膜向胞浆转移,下调Bcl-2的表达,并与线粒体途径有关。

全文目录

中文摘要  5-7
英文摘要  7-9
英文缩略词表  9-10
前言  10-14
材料和方法  14-23
结果  23-29
讨论  29-33
结论  33-34
参考文献  34-39
综述  39-48
  参考文献  44-48
攻读学位期间发表文章情况  48-49
致谢  49

哇巴因对急性淋巴细胞白血病细胞增殖和凋亡的影响

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