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法舒地尔通过抑制血管内皮细胞阻止肿瘤血管新生的实验研究

作　者: 张哲
导　师: 伍钢
学　校: 华中科技大学
专　业: 肿瘤学
关键词: 内皮细胞 法舒地尔 RhoA P-MLC(Thrl8/Serl9) 细胞骨架
分类号: R965
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


【目的】研究观察Rho/Rho激酶(ROCK)信号转导通路抑制剂——法舒地尔,对肿瘤侵袭转移过程中内皮细胞侵袭能力,粘附能力和细胞骨架的影响。【方法】体外培养内皮细胞(HUVEC),将培养的HSC分为5组,对照组,fasudil40 umol/L组,fasudil70umol/组,fasudil100umol/L组,fasudil120 umol/L组。采用MTT法检测fasudil对HUVE细胞增殖活性的影响,计算药物的半数抑制浓度(IC50), Transwell小室侵袭实验测定药物对内皮细胞(HUVEC)跨膜迁移数量的影响,用鬼笔环肽细胞骨架染色法检验药物对细胞骨架的影响。荧光实时定量PCR检测药物干预后对RHOAmRNA,PIGFmRNA,MMP-9mRNA表达的影响。Western印迹检测HSC磷酸化肌球蛋白轻链[phosphorylated myosin light chain.p-MLC(Thrl8/Serl9)]的表达。【结果】Fasudil的IC50为867.12±12.6umol/L,取浓度40 umol/L ,70umol/L,100umol/L,120 umol/L干预后,穿过人工基质膜的细胞由253.65±3.21降至133.32±1.25,(P<0.01),药物作用后的细胞骨架微丝断裂,HUVEC存在RHOA的表达,并且RHOA在转录水平和蛋白水平表达明显下降(P<0.01),下降程度与细胞侵袭能力变化成正相关。【结论】HUVEC存在RHOA,PIGF,MMP-9的表达,fasudil能明显降低体外HUVEC侵袭和迁移能力,改变细胞骨架结构,阻止肿瘤粘附侵袭能力和运动能力。

全文目录


中文摘要  5-7
英文摘要  7-9
前言  9-10
材料和方法  10-21
结果  21-28
讨论  28-31
小结  31-32
参考文献  32-36
综述  36-47
  参考文献  44-47
附录  47-48
致谢  48

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中图分类: > 医药、卫生 > 药学 > 药理学 > 实验药理学
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