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四种植原体病害的检测与鉴定

作　者: 陈小飞
导　师: 竺晓平
学　校: 山东农业大学
专　业: 植物病理学
关键词: 植原体 16S rRNA RFLP 系统进化分析
分类号: S432.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 32次
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内容摘要


本研究采用分子生物学方法,初步检测与鉴定了引起金钟花黄化、鹅掌柴白化、苹果叶黄化及苦豆子黄化四种植物植原体新病害,主要研究结果如下:从山东泰安采集带有黄化症状的金钟花,利用针对植原体的通用引物和巢式引物扩增到了植原体。借助系统进化树分析、RFLP分析及一致率分析确定该植原体属于16SrV-B。在山东泰安从叶片表现白化症状的鹅掌柴植株中扩增到植原体16S rRNA基因特异序列,16S rRNA基因序列分析表明该植原体属于翠菊黄化病组,进一步借助RFLP分析及一致率分析表明该植原体属于16SrI-B。从新疆阿拉尔地区采集带有黄化症状的苹果叶片,通过巢式PCR扩增到了植原体16S rRNA基因序列,并且利用特异引物扩增到了tuf基因序列,数据分析表明该植原体属于翠菊黄化组中的16SrI-B亚组,tuf I-B亚组。从新疆阿拉尔地区采集到植株矮缩叶片黄化的苦豆子,扩增到植原体16S rRNA基因,数据分析表明该植原体属于翠菊黄化病组中16SrI-B亚组。本实验中报道的四种植原体病害均为国内外首次报道。

全文目录


缩略表  8-9
中文摘要  9-10
ABSTRACT  10-11
一 引言  11-21
  1 植原体概述  11-12
    1.1 植原体及植原体病害  11
    1.2 植原体基因组  11-12
  2 植原体检测技术的研究概况  12-14
    2.1 电子显微镜技术  13
    2.2 DNA 分子杂交技术  13-14
      2.2.1 点印迹杂交分析法  13
      2.2.2 原位杂交技术  13-14
      2.2.3 Southern 杂交  14
  2.3 血清学检测技术  14-15
  2.4 PCR 技术  15-18
    2.4.1 巢式PCR（Nested-PCR）  16
    2.4.2 实时荧光PCR（Real-time PCR）  16-17
    2.4.3 联合PCR（Co-operational PCR）  17
    2.4.4 免疫捕获PCR（Immuno capturePCR，IC-PCR）  17
    2.4.5 竞争PCR（competitive PCR）  17-18
  3 植原体分类研究进展  18-20
    3.1 植原体传统分类  18
    3.2 植原体分子生物学分类  18-20
      3.2.1 基于165 rRNA 和rp 基因进行分类  18-19
      3.2.2 基于EF-Tu(tuf)基因进行分类  19
      3.2.3 植原体分类的其它分子基础  19-20
      3.2.4 我国植原体分类鉴定的现状  20
  4 本研究的立论依据及意义  20-21
二、研究材料和方法  21-29
  1 实验材料  21-22
    1.1 研究材料来源  21
    1.2 菌株和载体  21
    1.3 生化及分子生物学试剂  21
    1.4 实验所需试剂及配制  21-22
    1.5 主要实验仪器  22
  2 实验方法  22-27
    2.1 植物总DNA 提取  22-23
    2.2 植原体165 rRNA 基因的PCR 扩增  23-24
    2.3 植原体PCR 产物的克隆及测序  24-27
      2.3.1 琼脂糖凝胶电泳  24-25
      2.3.2 PCR 产物回收  25
      2.3.3 连接反应  25
      2.3.4 大肠杆菌感受态细胞的制备  25-26
      2.3.5 连接产物转化大肠杆菌  26
      2.3.6 碱裂解法提取质粒DNA  26-27
      2.3.7 重组质粒鉴定  27
  2.4 序列测定与分析  27-29
三 结果与分析  29-57
  1 金钟花黄化病植原体的鉴定  29-36
    1.1 感病植株的症状表现  29
    1.2 金钟花黄化病植原体基因PCR 扩增结果  29-30
    1.3 金钟花黄化病植原体165 rRNA 序列分析  30
    1.4 GFYP 系统进化树分析  30
    1.5 GFYP 165 rRNA 基因序列RFLP 分析  30-33
    1.6 GFYP 165 rRNA 基因序列的一致率分析  33-34
    1.7 GFYP tuf 基因的扩增、克隆与序列比对  34-36
  2 鹅掌柴白化病植原体的鉴定  36-41
    2.1 感病植株的症状表现  36
    2.2 鹅掌柴白化病植原体165 rRNA 基因PCR 扩增结果  36-37
    2.3 鹅掌柴白化病植原体165 rRNA 序列分析  37
    2.4 UTWP 系统进化树分析  37
    2.5 UTWP 165 rRNA 基因的RFLP 分析  37-40
    2.6 UTWP 165 rRNA 基因序列的一致率分析  40-41
  3 苹果叶黄化病植原体的鉴定  41-51
    3.1 感病植株的症状表现  41
    3.2 苹果叶黄化病植原体165 rRNA 基因PCR 扩增结果  41-43
    3.3 ALYP 的系统进化树分析  43
    3.4 ALYP 165 rRNA 基因序列RFLP 分析  43
    3.5 ALYP 165 rRNA 基因序列一致率分析  43-47
    3.6 ALYP tuf 基因序列的扩增、克隆与序列比对  47-51
      3.6.1 ALYP tuf 基因序列的扩增与克隆  47
      3.6.2 ALYP tuf 基因序列的系统进化树分析  47-49
      3.6.3 ALYP tuf 基因序列的 RFLP 分析  49-50
      3.6.4 ALYP tuf 基因序列的一致率分析  50-51
  4 苦豆子黄化病植原体的鉴定  51-57
    4.1 感病植株的症状表现  51
    4.2 苦豆子黄化病植原体 16S rRNA 基因 PCR 扩增结果  51-52
    4.3 SAYP 的系统进化树分析  52
    4.4 SAYP 16S rRNA 基因序列 RFLP 分析  52-55
    4.5 SAYP 16S rRNA 基因序列一致率分析  55-57
四 结论与讨论  57-59
参考文献  59-67
致谢  67-68
高校教师硕士学位论文内容简介及自评  68

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中图分类: > 农业科学 > 植物保护 > 病虫害及其防治 > 植物病害及其防治 > 侵（传）染性病害
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