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鸡源性益生芽孢杆菌的筛选鉴定、固体发酵的优化及其应用效果的研究
作 者: 卢龙娣
导 师: 林跃鑫
学 校: 福建师范大学
专 业: 微生物学
关键词: 芽孢杆菌 筛选鉴定 固体发酵 应用效果
分类号: S816.3
类 型: 硕士论文
年 份: 2010年
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内容摘要
芽胞杆菌能以菌体和芽孢两种形式存在,其芽孢能够耐受高温、酸碱以及机械挤压等作用,因此与其它形式的微生态制剂相比芽孢杆菌微生态制剂具有众多的优势,是优良的微生态制剂菌种。本文从健康土鸡盲肠中分离获得98株耐热芽孢杆菌,依次以菌株产蛋白酶、产淀粉酶、产纤维素酶能力为初筛标准,以菌株对酸碱盐的耐受性及对病原菌生长的抑制为复筛标准,筛选出具有益生潜力的Y31菌株;研究了Y31菌株对常见兽用抗生素的药物敏感性,分析了其对高铜、温度、pH等的耐受性;对Y31进行了16S rDNA分子鉴定,将Y31初步鉴定为枯草芽孢杆菌。采用单因子试验研究了Y31生长繁殖的最适碳源氮源,用Placke-Burman试验设计、爬坡试验及响应面分析法优化培养基中的其他组成成份,确定了适合芽孢杆菌固体发酵的培养基组成:按麸皮:豆粕为6:1的比例配置成固体基质,在此基础上添加0.001%硫酸锰,0.02%硫酸镁,0.24%葡萄糖,0.15%硫酸铵,10.29%玉米粉;采用单因素试验优化了固体发酵条件:发酵温度37℃,装料量40g/250mL,料水比1:0.8,接种量10%(v/w),发酵时间56 h。在优化后的培养基和发酵条件下,枯草杆菌Y31的产芽孢量为17.01×109CFU/g,用60℃,24 h烘干后,每克发酵产物的活菌数为24.31×109CFU/g。对自行研制的枯草杆菌微生态制剂Y31和LBS53进行AA白羽肉仔鸡喂养试验。通过检测肉鸡生产性能、成活率、腹泻率、新城疫(ND)抗体效价、血清生化指标、血清免疫球蛋白指标、血常规指标、免疫器官指数、肠道消化酶活性、盲肠微生物、肠黏膜形态结构等指标来评价芽孢杆菌制剂在肉鸡生产上的应用效果,结果表明枯草杆菌制剂能够促进肉鸡的生长、提高其免疫性能。
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全文目录
中文摘要 2-3 Abstract 3-4 中文文摘 4-8 目录 8-12 第1章 绪论 12-22 1.1 微生态制剂研究进展与应用现状 12-19 1.1.1 微生态制剂研究背景 12-13 1.1.2 微生态制剂的概念和发展概况 13-14 1.1.3 微生态制剂的作用机理 14-16 1.1.4 微生态制剂的种类 16-17 1.1.5 微生态制剂在养殖业上的应用效果 17-18 1.1.6 微生态制剂的发展现状与发展趋势 18-19 1.2 本课题的选题依据与主要研究内容 19-22 第2章 芽孢杆菌的筛选与鉴定 22-44 2.1 前言 22 2.2 材料 22-23 2.2.1 主要仪器 22-23 2.2.2 主要试剂 23 2.2.3 主要培养基与溶液配制 23 2.3 方法 23-28 2.3.1 样品采集 23-24 2.3.2 芽孢杆菌的分离 24 2.3.3 芽孢杆菌菌悬液的制备 24 2.3.4 芽孢杆菌初筛 24 2.3.5 芽孢杆菌复筛 24-25 2.3.6 芽孢杆菌其它生物学特性分析 25-26 2.3.7 芽孢杆菌的16S rDNA的分子鉴定 26-28 2.4 结果与分析 28-41 2.4.1 芽孢杆菌的分离 28 2.4.2 芽孢杆菌的初筛 28-31 2.4.3 芽孢杆菌的复筛 31-33 2.4.4 芽孢杆菌筛选结果 33-34 2.4.5 Y31菌株其它生物学特性分析 34-37 2.4.6 Y31菌株16S rDNA分子鉴定 37-41 2.5 小结 41-44 第3章 枯草杆菌Y31固体发酵的研究 44-64 3.1 前言 44 3.2 材料 44 3.2.1 菌种 44 3.2.2 主要仪器 44 3.3 方法 44-46 3.3.1 活菌计数方法 44 3.3.2 芽孢计数方法 44 3.3.3 种子液的制备 44-45 3.3.4 固体发酵培养基质的选择及其他营养成份的优化 45 3.3.5 固体发酵条件的优化 45-46 3.3.6 发酵终止时间对固体发酵产孢量的影响 46 3.3.7 发酵产物干燥条件的研究 46 3.4 结果与分析 46-63 3.4.1 固体基质的筛选 46-49 3.4.2 固体发酵培养基的优化 49-57 3.4.3 固体发酵条件的优化 57-61 3.4.4 固体发酵过程曲线 61-62 3.4.5 固体发酵产物干燥条件的研究 62-63 3.5 小结 63-64 第4章 枯草杆菌制剂喂鸡效果的研究 64-84 4.1 前言 64 4.2 材料 64 4.2.1 试验动物 64 4.2.2 枯草杆菌制剂 64 4.2.3 试验饲料 64 4.3 方法 64-68 4.3.1 试验设计 64-65 4.3.2 饲养管理 65 4.3.3 检测项目及检测方法 65-68 4.3.4 数据处理与分析 68 4.4 结果与分析 68-79 4.4.1 枯草杆菌制剂对肉鸡生产性能的影响 68-70 4.4.2 枯草杆菌制剂对肉鸡成活率和腹泻率的影响 70 4.4.3 枯草杆菌制剂对肉鸡ND抗体效价的影响 70-71 4.4.4 枯草杆菌制剂对肉鸡禽流感免疫抗体效价的影响 71 4.4.5 枯草杆菌制剂对肉鸡血清生化指标的影响 71-72 4.4.6 枯草杆菌制剂对肉鸡血清免疫球蛋白含量的影响 72-73 4.4.7 枯草杆菌制剂对肉鸡血常规指标的影响 73-74 4.4.8 枯草杆菌制剂对肉鸡免疫器官指数的影响 74-75 4.4.9 枯草杆菌制剂对肉鸡肠道消化酶的影响 75-78 4.4.10 枯草杆菌制剂对肉鸡盲肠微生物的影响 78 4.4.11 枯草杆菌制剂对肉鸡小肠黏膜切片的影响 78-79 4.5 讨论 79-84 4.5.1 枯草杆菌制剂对肉鸡生产性能的影响 79-80 4.5.2 枯草杆菌制剂对肉鸡成活率和腹泻率的影响 80 4.5.3 枯草杆菌制剂对肉鸡免疫性能的影响 80-81 4.5.4 枯草杆菌制剂对肉鸡血清生化的影响 81-82 4.5.5 枯草杆菌制剂对肉鸡血常规的影响 82 4.5.6 枯草杆菌制剂对肉鸡消化酶活性的影响 82 4.5.7 枯草杆菌制剂对肉鸡盲肠微生物的影响 82-83 4.5.8 枯草杆菌制剂对肉鸡肠黏膜结构的影响 83-84 总结 84-88 一、益生芽孢杆菌的筛选与鉴定 84 二、枯草杆菌Y31固体发酵研究 84-85 三、枯草杆菌制剂喂鸡效果的研究 85-88 参考文献 88-94 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 94-96 致谢 96
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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 普通畜牧学 > 饲料 > 饲料微生物学
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