学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

小反刍兽疫检测方法的建立和初步应用

作　者: 毛立
导　师: 才学鹏；岳城
学　校: 新疆农业大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 小反刍兽疫检测 RT-PCR cELISA
分类号: S855
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 59次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

小反刍兽疫是一种跨国传播的重大烈性传染病,主要感染山羊和绵羊等小反刍动物,其发病率和死亡率很高,已经引起广泛的重视。目前小反刍兽疫在世界范围内广泛流行,对我国的养羊业构成严重威胁,因此,开展小反刍兽疫检测技术研究对我国小反刍兽疫病防控具有现实意义。通过分析小反刍兽疫病毒不同毒株的N基因序列,根据N基因保守区序列设计一对引物,根据羊肌动蛋白基因序列设计另一对引物作为RT-PCR内参,建立了小反刍兽疫RT-PCR诊断方法,预期扩增片段分别为687bp和493bp。通过对RT-PCR条件优化,筛选了最佳反应条件,在此条件下,最低可检测到12 TCID50/mL的病毒RNA。用该方法对人工感染小反刍兽疫病毒Nigeria 75/1株羊的血液样品检测,可扩增出目的基因片断。将Nigeria 75/1株N基因克隆到pGEX-4T-1载体,诱导表达并优化表达条件,结果表明选择LB培养基、37℃、0.2mM IPTG诱导4h时表达量最大。纯化该重组N蛋白免疫BALB/c小鼠,采集鼠脾细胞与SP2/O骨髓瘤细胞融合,筛选得到分泌阳性抗体的6株杂交瘤细胞株,制备腹水后测定单抗生物学性质,其中5株单克隆抗体耐热、耐酸碱且效价较高。经检测,筛选出一株适用于建立竞争ELISA方法的单抗,建立了竞争ELISA检测方法,其最佳反应条件为：单抗稀释浓度1：5×104；包被病毒稀释度1：100；血清加入量在2-8μL内均可；包被液为1% BSA稀释液；竞争反应时间为0.5-2h。检测国内176份血清样品,与商品化试剂盒相比,相对敏感性为84%,相对特异性为97.7%。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-9
第1章绪论  9-25
  1.1 小反刍兽疫病毒研究进展  9-13
  1.2 PPR的流行概况  13-16
  1.3 诊断方法研究进展  16-22
  1.4 PPR疫苗研究进展  22-24
  1.5 小结和本研究的意义  24-25
第2章小反刍兽疫病毒RT-PCR 检测方法的建立  25-40
  2.1 试验材料  25-27
  2.2 试验方法  27-34
  2.3 结果与分析  34-37
  2.4 讨论  37-40
第3章小反刍兽疫重组N蛋白的表达  40-51
  3.1 试验材料  40-42
  3.2 方法  42-46
  3.3 结果  46-49
  3.4 讨论  49-51
第4章针对PPRV N蛋白单克隆抗体的制备和鉴定  51-67
  4.1 材料  51-53
  4.2 方法  53-58
  4.3 结果  58-64
  4.4 分析与讨论  64-67
第5章竞争ELISA检测方法的建立  67-76
  5.1 材料  67-68
  5.2 方法  68-69
  5.3 试验结果  69-73
  5.4 讨论  73-76
参考文献  76-83
致谢  83-85
作者简介  85

小反刍兽疫检测方法的建立和初步应用

内容摘要

全文目录

相似论文