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抗肌肉乳化病候选品系三疣梭子蟹几个免疫因子的研究

作　者: 郑萍萍
导　师: 王春琳
学　校: 宁波大学
专　业: 海洋生物学
关键词: 三疣梭子蟹筛选溶藻弧菌抗脂多糖因子血蓝蛋白血清免疫酶
分类号: S945
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

三疣梭蟹营养丰富,是重要的经济水产动物,但是肌肉乳化病严重影响了梭子蟹的养殖效益。为此我实验室用肌肉乳化病的致病菌-溶藻弧菌对其连续筛选育种2代(以下简称筛选蟹F1, F2),家系选育第3代(以下简称筛选蟹F3)。本文以抗脂多糖因子(ALF),血蓝蛋白,血清中的重要免疫酶类,如水解酶:酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP),保护酶:超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)和酚氧化酶(PO)为指标,采用半定量RT-PCR方法测定ALF表达量,用紫外分光光度法测定血蓝蛋白含量,用试剂盒测定各血清免疫酶活力的方法,研究了3代筛选蟹的免疫防御机制。同期的普通梭子蟹作为对照。结果如下:1.溶藻弧菌感染6h对筛选蟹F1代肝胰脏血清中免疫酶活力和ALF表达量的影响。筛选蟹F1代和同期的普通蟹血清中免疫酶活性在12-36h达到最大值;肝胰脏中ALF表达量分别在从感染开始计9h和12h达到最大值,然后逐渐下降;各免疫因子可被溶藻弧菌激活,并且存在明显的时间依赖性。筛选蟹F1的血清免疫酶活力和ALF表达量均优于同期的普通蟹。2.温度和盐度胁迫对筛选蟹F2代血蓝蛋白和血清中免疫酶活力的影响温度和盐度胁迫下,筛选蟹F2代和同期的普通蟹应激反应强烈,血蓝蛋白含量和血清免疫酶活力随时间表现出有升有降的不同变化趋势。温度和盐度胁迫对三疣梭子蟹非特异性免疫影响显著,筛选蟹F2代的血蓝蛋白含量和血清免疫酶活力均显著高于同期的普通蟹,筛选蟹F2比普通蟹F1在非特异性免疫因子方面具明显的免疫优势。3.筛选蟹F3代养殖期不同发育阶段ALF表达量研究筛选蟹F3代和同期的普通蟹ALF在溞状幼体阶段（1-4)变化较小;从溞4-大眼幼体阶段,ALF表达量显著上升(P>0.05);大眼幼体—稚蟹阶段无明显变化,但此时ALF表达量为所有发育阶段中最大。三疣梭子蟹从溞状幼体开始的整个发育阶段均有ALF表达,证明其为组成性表达,是免疫体系中一个非常重要且必需的组成成分,在其各个发育阶段扮演着帮助机体抵御外来微生物入侵的角色。在溞状幼体-稚蟹整个发育阶段,筛选蟹F3和同期普通蟹的ALF表达量没有显著差异。但是从大眼幼体开始,筛选蟹F3的ALF表达量高于普通蟹F1,可能从大眼幼体开始逐渐显现免疫优势。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-10
引言  10-11
1 绪论  11-22
  1.1 三疣梭子蟹肌肉乳化病病害研究现状  11-12
  1.2 无脊椎动物的免疫防御机制  12-17
    1.2.1 体液免疫  12-15
    1.2.2 细胞免疫  15-17
  1.3 抗脂多糖因子  17-19
    1.3.1 ALF 的结构和功能  17-18
    1.3.2 研究ALF 的意义和前景  18-19
  1.4 血蓝蛋白  19-20
    1.4.1 血蓝蛋白的免疫学特性  19-20
    1.4.2 血蓝蛋白的结构  20
  1.5 血清酶  20-22
2 溶藻弧菌感染对筛选蟹F1 代相关免疫指标的影响  22-32
  2.1 溶藻弧菌感染对筛选蟹F1 代相关血清酶活力的影响  23-25
    2.1.1 材料和方法  23-24
    2.1.2 结果  24
    2.1.3 讨论  24-25
  2.2 溶藻弧菌感染对筛选蟹F1 代肝胰脏中ALF 表达的影响  25-28
    2.2.1 材料和方法  25-27
    2.2.2 结果  27-28
    2.2.3 讨论  28
  2.3 小结  28-32
3 温度和盐度胁迫对筛选蟹F2 代血清非特异性免疫指标的影响  32-44
  3.1 温度胁迫对筛选蟹F2 代血清非特异性免疫指标的影响  32-36
    3.1.1 材料和方法  32-33
    3.1.2 结果  33-34
    3.1.3 讨论  34-36
  3.2 盐度胁迫对筛选蟹F2 代血清非特异性免疫因子的影响  36-39
    3.2.1 材料和方法  36
    3.2.2 结果  36-37
    3.2.3 讨论  37-39
  3.3 小结  39-44
4 筛选蟹F3 代养殖期不同发育阶段ALF 表达  44-47
  4.1 材料和方法  44
    4.1.1 材料  44
    4.1.2 方法  44
  4.2 结果  44-45
  4.3 讨论  45
  4.4 小结  45-47
5 本研究的主要结论与创新点  47-49
  5.1 结论  47
    5.1.1 溶藻弧菌感染6h 对筛选蟹F1 代免疫指标的影响  47
    5.1.2 短时温盐胁迫对筛选蟹F2 代免疫指标影响  47
    5.1.3 筛选蟹F3 代不同发育阶段ALF 表达量研究  47
  5.2 创新点  47
  5.3 研究展望  47-49
参考文献  49-56
在学研究成果  56-57
致谢  57

抗肌肉乳化病候选品系三疣梭子蟹几个免疫因子的研究

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