学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

重金属镉单克隆抗体的制备及其免疫学特性研究

作　者: 庞铄权
导　师: 郭明
学　校: 浙江林学院
专　业: 森林培育
关键词: 镉离子人工抗原单克隆抗体快速检测酶联免疫吸附测定
分类号: X830
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 50次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

本研究通过1-（4-异硫氰苄基）乙烯基二胺-N,N,N’,N’-四乙酸（IEDTA）作为双功能螯合剂偶联镉离子与人血清白蛋白（HSA）和牛血清白蛋白（BSA）,合成了镉离子人工抗原。利用荧光光谱分析了镉离子人工合成抗原的荧光特性;利用紫外分光光度法和SDS-PAGE电泳法对人工抗原进行了鉴定,通过原子吸收分光光度法测定了偶联比、并用2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）法检测ε-氨基残基的取代程度。结果表明:几种检测方法检测结果一致,人工抗原合成成功;Cd-IEDTA-BSA、Cd-IEDTA-HSA的偶联比分别为11-12:1、14-16:1;TNBS法检测Cd-IEDTA-BSA、Cd-IEDTA-HSA两种人工抗原的ε-氨基酸的取代程度分别为22.75%、29.71%;成功合成的镉离子人工抗原的荧光强度呈规律性降低,通过荧光相图分析表明镉离子人工抗原合成过程中血清蛋白质分子的折叠状态符合典型的“二态模型”;偏振荧光光谱结果表明镉离子人工抗原合成过程中血清蛋白质分子的色氨酸残基微区构象发生了一定变化,直接导致载体蛋白质构象的改变。用成功合成的镉离子人工抗原Cd-IEDTA-BSA免疫BALB/c小鼠,获得了针对镉离子的抗血清;应用杂交瘤制备技术,制备出了针对镉离子的单克隆抗体,对单抗的类、亚类、抗体的灵敏度和交叉反应率等特性进行了测定;通过体内诱导法获得了大量的腹水型单抗并进行了纯化,最后对ELISA检测体系的最佳反应条件进行了研究,并绘制出了ELISA检测标准曲线。结果表明:抗血清的效价达到了1: 12800;融合后,通过筛选和亚克隆获得了1C4、3E6、4E2、6D7四株阳性杂交瘤细胞,定性试纸条法测得四株杂交瘤细胞均为IgG1亚类,轻链为λ型;单克隆抗体针对镉离子的IC₅₀为446.68 ng·mL^-1,检测限达到了16.21 ng·mL^-1;获得的单抗除了与Hg²⁺有交叉反应外,与其它重金属金属离子交叉反应率很低;获得的腹水型单抗,效价达到了1: 160000;ELISA检测体系研究结果表明美国Corning 96孔酶标板综合性能较好,以37℃、2h包被、10%的小牛血清或1%的明胶作为封闭试剂为最优,抗原的最佳包被浓度为2μg·mL^-1,抗体的最佳稀释浓度为1: 3000;ELISA检测标准曲线方程为y=27.78x-23.81（R²=0.9950,n=8,SD=2.1235）。

重金属镉单克隆抗体的制备及其免疫学特性研究

内容摘要

全文目录

相似论文