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鼻咽癌细胞系5-8F与6-10B总蛋白质与分泌蛋白质的差异蛋白质组学研究

作　者: 向亚莉
导　师: 肖志强
学　校: 中南大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 鼻咽癌转移分泌蛋白质组双向凝胶电泳质谱
分类号: R739.63
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
下　载: 85次
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内容摘要

鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma,NPC)是一种好发于东南亚地区及我国南方各省的常见恶性肿瘤。早期转移是NPC的显著特征之一和患者死亡的主要原因,而且NPC放疗后局部残灶复发、远处转移亦是制约其疗效和预后的瓶颈。因此,研究NPC的转移机制、寻找预测转移的分子标志物对NPC疗效和预后起关键作用,具有重要的理论和临床应用价值。本研究以一对来自同一亲本、具有不同转移潜能的NPC细胞系5-8F和6-10B为转移模型,应用双向凝胶电泳(2-DE)技术分离5-8F和6-10B细胞的总蛋白和分泌蛋白质;利用PDQuest图像分析软件比较两株细胞总蛋白和分泌蛋白质2-DE图谱的异同;应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和电喷雾-四极杆-飞行时间串联质谱(ESI-Q-TOF MS/MS)鉴定差异表达的蛋白质,并利用生物信息学资源对所鉴定蛋白质的功能和亚细胞定位进行分析。然后采用Western blot验证部分差异蛋白质在5-8F和6-10B细胞中的表达水平,采用免疫组化染色检测差异蛋白质nm23-H1在NPC组织和颈淋巴结转移NPC中的表达。主要结果如下:1.建立了高转移NPC细胞系5-8F和无转移潜能的NPC细胞系6.10B细胞总蛋白和分泌蛋白质的2-DE图谱,识别了123个差异表达的蛋白质点,鉴定出29个非冗余的差异表达的蛋白质,并对这些蛋白质进行了功能分类和亚细胞定位;2.Western blot分析结果显示:差异蛋白质AnnexinA1、Stratifin、Keratin-8和nm23-H1在5-8F和6-10B细胞中的差异表达水平与比较蛋白质组学研究结果一致;3.nm23-H1在高转移的5-8F NPC细胞总蛋白中的表达水平高于无转移潜能的6-10B细胞,在颈淋巴结转移NPC中的表达水平亦高于原发NPC;4、差异蛋白质肽基脯氨酰顺反异构酶A(PPIA)存在乙酰化并瓜氨酸化或者苯乳酸化修饰。本研究鉴定了29个可能与NPC转移相关的蛋白质,发现nm23-H1可能具有促进NPC转移的作用以及PPIA存在可能影响蛋白质功能的翻译后修饰,研究结果为阐明NPC转移机制以及筛选NPC转移分子标志物提供了实验依据和新线索。

全文目录

中文摘要  5-7
英文摘要  7-11
缩写词简表  11-13
前言  13-15
技术路线  15-16
材料与方法  16-24
  1 材料  16-17
    1.1 细胞系  16
    1.2 组织  16
    1.3 试剂  16-17
    1.4 软件  17
    1.5 仪器  17
  2 方法  17-24
    2.1 细胞培养  17-18
    2.2 蛋白质的抽提  18-19
      2.2.1 细胞总蛋白的抽提  18
      2.2.2 细胞分泌蛋白质的抽提  18-19
        2.2.2.1 细胞培养上清的预处理  18
        2.2.2.2 细胞培养上清的超滤离心  18-19
        2.2.2.3 细胞分泌蛋白质的裂解  19
    2.3 蛋白浓度测定  19-20
    2.4 双向凝胶电泳  20
    2.5 考染显色  20
    2.6 凝胶图像分析  20-21
    2.7 质谱样品制备  21
    2.8 质谱分析  21-22
    2.9 数据库查询  22
    2.10 Western blot分析  22-23
    2.11 免疫组化  23-24
结果  24-41
  1 蛋白浓度测定  24-25
  2 人NPC细胞系5-8F和6-10B的总蛋白和分泌蛋白质双向凝胶电泳图谱的建立  25-28
    2.1 细胞总蛋白的双向凝胶电泳图谱及图像差异分析  25-27
    2.2 细胞分泌蛋白质的双向凝胶电泳图谱及图像差异分析  27-28
  3 差异蛋白质点的质谱鉴定  28-34
    3.1 细胞总蛋白的差异蛋白质点的质谱鉴定  28-32
    3.2 分泌蛋白质的差异蛋白质点的质谱鉴定  32-34
  4 蛋白质的翻译后修饰  34-37
  5 差异表达的蛋白质的功能分类及亚细胞定位  37-39
    5.1 细胞总蛋白差异表达的蛋白质的功能分类及亚细胞定位  37-38
    5.2 分泌蛋白质组差异表达的蛋白质的功能分类及亚细胞定位  38-39
  6 差异蛋白质表达水平的验证  39-41
    6.1 Western Blot检测差异蛋白质在5-8F和6-10B中的表达水平  39-40
    6.2 免疫组织化学方法检测nm23-H1的表达  40-41
讨论  41-48
  1 实验方法  41-43
  2 人NPC细胞5-8F和6-10B的总蛋白和分泌蛋白质双向凝胶电泳图谱的建立  43
  3 5-8F和6-10B细胞的差异表达蛋白质  43-44
  4 5-8F和6-10B细胞差异蛋白质的表达水平验证  44-45
  5 差异蛋白质与NPC转移的相关性分析  45-48
结论  48-49
参考文献  49-52
综述  52-64
致谢  64-65
攻读学位期间主要的研究成果及奖励  65

鼻咽癌细胞系5-8F与6-10B总蛋白质与分泌蛋白质的差异蛋白质组学研究

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