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抗仔猪大肠杆菌病原性腹泻IgY抗体微胶囊的初步制备及缓释效果评价

作 者: 梁安莉
导 师: 吴健敏
学 校: 广西大学
专 业: 动物传染病及分子免疫学
关键词: 肠毒素大肠杆菌 IgY 口服壳聚糖-海藻酸钠微胶囊 人工肠液 人工胃液
分类号: S858.28
类 型: 硕士论文
年 份: 2008年
下 载: 202次
引 用: 3次
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内容摘要


肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia Coli:ETEC)感染引起仔猪腹泻肠道传染病。此病不仅严重影响仔猪的生长发育、而且导致高死亡率。由ETEC引起仔猪腹泻发病率约占引起仔猪腹泻病原的40%,其爆发严重危害养猪业的发展。本研究初步开发一种产毒素大肠大肠杆菌的IgY壳聚糖-海藻酸钠微胶囊,通过口服,被肠道吸收后,发挥被动免疫作用,对该病进行预防及治疗。1、将产肠毒素埃希氏大肠杆菌(ETEC)K88,K99,987P标准菌株混合,分别与油乳剂、蜂胶、氢氧化铝胶三种免疫佐剂混合,用该三种佐剂对随机分组的健康产蛋鸡进行首免、二免、三免间隔分别为14天(d)及31天(d)免疫,摸索卵黄抗体的消长规律。经过比较发现,以油乳剂作为免疫佐剂,对产蛋鸡进行首免、二免、三免间隔30d的免疫方案,能产生较高效价的IgY抗体,且维持时间较长。收集此IgY抗体,进行去脂纯化。选用水稀释法、氯仿抽提法,正辛酸-硫酸铵共沉淀法三种方法进行纯化效果的比较。以IgY纯化的效果、纯化后的活性、回收率、含量作为指标,发现以水稀释法进行去脂,硫酸铵除杂蛋白效果最为理想,价格低廉,适宜大规模生产。2、猪源大肠杆菌IgY壳聚糖-海藻酸钠(ACS)微胶囊制备条件的探讨,主要分为两部分:第一部分筛选成囊性好且膜强度适中,适合进行胃肠控释的壳聚糖-海藻酸钠的空白微胶囊最佳成囊条件,经单因素试验对主要影响成囊条件的两个因素:海藻酸钠及氯化钙的浓度进行筛选。并以影响微胶囊膜强度的因素为条件,以微胶囊经人工胃液(3h)-人工肠液(7h)膨胀系数为研究对象,进行正交实验L9(43),初步确定成囊效果,缓释性最好的制备条件为:0.2-0.4%混合分子量的壳聚糖溶液中加入氯化钙(CaCl2),使CaCl2的浓度为1-2%,并调节pH到4-6,1-3%海藻酸钠,反应时间15min,37℃晾干3h。第二部分,把IgY按上述条件进行包囊,研究该微胶囊对IgY的最大包封浓度,经测定IgY在壳聚糖.海藻酸钠微胶囊中的最高包封浓度为75%。3、肠毒素大肠杆菌IgY壳聚糖-海藻酸钠微胶囊经体外释放试验证实:IgY壳聚糖-海藻酸钠微胶囊,能在人工胃液(SGF)中(3h)对IgY起到良好的保护作用,在人工肠液(SIF)6h以内IgY的释放率可高达90%以上。结果说明IgY壳聚糖-海藻酸钠微胶囊能在胃肠环境中起良好的控释作用。对IgY壳聚糖-海藻酸钠微胶囊进行保存实验,发现在12个月的保存时间内能稳定地保存芯材的活性及蛋白含量。

全文目录


摘要  4-6
ABSTRACT  6-12
论文常用缩写词  12-13
第一章 文献综述  13-26
  第一部分 卵黄抗体的研究进展  13-19
  第二部分 微胶囊的研究进展  19-25
  第三部分 本课题研究目的和意义  25-26
第二章 猪源大肠杆菌IgY的获得、纯化与稳定性检测  26-45
  实验一 猪源大肠杆菌IgY的获得  26-32
    1.材料方法  26-28
    2.结果  28-30
    3.分析与讨论  30-31
    4.小结  31-32
  实验二 IgY卵黄抗体的提取与初步纯化  32-41
    1.材料与方法  32-37
    2.结果  37-39
    3.分析与讨论  39-40
    4.小结  40-41
  实验三 IgY稳定性评价  41-45
    1.材料与方法  41-42
    2.结果  42-44
    3.分析与讨论  44
    4.小结  44-45
第三章 口服肠溶型IgY壳聚糖—海藻酸钠微胶囊的制备  45-59
  实验一 口服肠溶型壳聚糖-海藻酸钠空白微胶囊制备条件的筛选  45-55
    1.材料与方法  46-48
    2.结果  48-52
    3.分析与讨论  52-54
    4.小结  54-55
  实验二 IgY壳聚糖-海藻酸钠微胶囊的初步开发  55-59
    1.材料与方法  55-56
    2.结果  56-58
    3.分析与讨论  58
    4.小结  58-59
第四章 IgY壳聚糖-海藻酸钠微胶囊的初步评价  59-69
  实验一 IgY ACS微胶囊在人工胃液人工肠液中的控释性能  59-65
    1.材料与方法  59-60
    2.结果  60-63
    3.讨论与分析  63-64
    4.小结  64-65
  实验二 IgY ACS微胶囊常温下保存时间的初步评价  65-69
    1.材料及方法  65-66
    2.结果  66-67
    3.分析与讨论  67-68
    4.小结  68-69
结论  69-71
参考文献  71-77
致谢  77-78
攻读论文期间发表论文情况  78

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